【摘 要】
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[目的]克隆人类DNA聚合酶(pol-β)基因全长cDNA,构建该基因的真核高效表达载体.[方法]抽提人胚肺纤维细胞HLF总RNA进行RT-PCR扩增,用pGEM-T载体经T/A克隆、DNA测序确定后,用
【机 构】
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中山大学公共卫生学院卫生毒理教研室,深圳市防疫站,中山大学生命科学学院,广东省疾病控制中心
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[目的]克隆人类DNA聚合酶(pol-β)基因全长cDNA,构建该基因的真核高效表达载体.[方法]抽提人胚肺纤维细胞HLF总RNA进行RT-PCR扩增,用pGEM-T载体经T/A克隆、DNA测序确定后,用双酶切将pol-β全长cDNA定向克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1,转染大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆,双酶切鉴定重组质粒.[结果]经RT-PCR获得1.03 kb的产物,经DNA测序,确定所扩增片段为人类pol-β基因全长cDNA,进而成功筛选出真核表达载体pEGFP-C1-β.[结论]成功构
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