【摘 要】
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目的构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38KDEL）的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表
【机 构】
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四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室,四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金（30470613）和教育部博士点专项基金（20040610053）资助
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目的构建铜绿假单胞菌外毒素衍生物（PE38KDEL）的原核表达载体并对其表达的蛋白进行鉴定。方法采用PCR方法扩增本实验所需要的PE38KDEL基因片段,再通过酶切及连接反应构建原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL,重组载体经过限制性内切酶酶切、PCR扩增鉴定及DNA序列测定证实插入片段正确后,转化感受态大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳后及蛋白免疫印迹法分别测定其大小和特异性。结果经鉴定证实原核表达载体pGEX-4T-1-PE38KDEL构建成功,且在大肠杆
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