【摘 要】
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目的:建立一种快速、灵敏、易于操作的通用荧光定量RT-PCR方法用于检测肠道病毒。方法:在肠道病毒5′端的高度保守序列中选取能检测出所有型肠道病毒RNA的通用引物及Taqm an
【机 构】
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郑州职业技术学院; 河南省生物工程技术研究中心;
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目的:建立一种快速、灵敏、易于操作的通用荧光定量RT-PCR方法用于检测肠道病毒。方法:在肠道病毒5′端的高度保守序列中选取能检测出所有型肠道病毒RNA的通用引物及Taqm an探针。对荧光RT-PCR反应条件进行优化,用测定了TC ID50的Cox B3病毒进行10倍梯度稀释以检测该方法最低检测病毒量,同时用45份心肌炎患者血液标本和12份脑炎患者脑脊液对方法进行检测。结果:荧光定量RT-PCR系统对于Cox B3病毒的最低检测量为0.01 TCID50/m l(50%组织培养感染剂量/m l)并且可以检测到小于1000拷贝/m l的含有Cox B3病毒5′端保守区DNA的质粒。同时45份病毒性心肌炎患者急性期血清临床标本中31份阳性,阳性率为68.9%。12份病毒性脑炎患者急性期脑脊液标本7份阳性,阳性率为58.3%。结论:本研究建立的TaqM an荧光定量RT-PCR方法,为肠道病毒的临床诊断及流行病学调查提供了一种快速、高灵敏度的实用方法。
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