【摘 要】
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目的 构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体.方法 首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的穿梭质粒腺相关病毒穿梭质粒-可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(pAAV-sTRAIL),将穿梭质粒转染入HEK 293细胞(人胚肾细胞系)中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAI
【机 构】
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516538,广东省陆丰市甲子镇人民医院外科,广州医学院附属广州市第一人民医院普外科,广州医学院附属广州市第一人民医院普外科,广州医学院附属广州市第一人民医院普外科
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目的 构建一种携带肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体.方法 首先构建携带可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(sTRAIL)基因的穿梭质粒腺相关病毒穿梭质粒-可溶性肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(pAAV-sTRAIL),将穿梭质粒转染入HEK 293细胞(人胚肾细胞系)中,采用细胞内质粒DNA同源重组法构建重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL.以噬斑分析法筛选单克隆rAAV-sTRAIL;PCR法鉴定阳性rAAV-sTRAIL;氯化铯密度梯度离心法纯化rAAV-sTRAIL;紫外分光光度仪测定rAAV-sTRAIL颗粒数及纯度,噬斑分析法测定rAAV-sTRAIL感染滴度;Western免疫印迹检测rAAV-sTRAIL在HEK 293细胞中的表达情况.结果 成功构建了rAAV-sTRAIL,制备的病毒纯度好、滴度高,且在HEK 293转导细胞中能有效表达目的基因sTRAIL.结论 构建的重组腺相关病毒载体rAAV-sTRAIL,为研究TRAIL抗肿瘤细胞效应及临床应用提供先进的载体系统。
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