【摘 要】
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目的探讨大肠杆菌对Core 2和Core 4 O-型糖链合成障碍的肠上皮细胞的黏附和侵袭的影响。方法采用针对C2GnT-2的干扰质粒和对照质粒对结肠癌HT-29细胞进行转染,通过G418筛选建
【机 构】
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第三军医大学西南医院全军消化病研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目(81170340)~~
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目的探讨大肠杆菌对Core 2和Core 4 O-型糖链合成障碍的肠上皮细胞的黏附和侵袭的影响。方法采用针对C2GnT-2的干扰质粒和对照质粒对结肠癌HT-29细胞进行转染,通过G418筛选建立稳定转染的细胞系,采用Realtime PCR和Western blot方法检测干扰效率,选取干扰最有效的稳定细胞系与肠致病性大肠杆菌(enteropathogenic Escherichia coli,EPEC)和肠出血性大肠杆菌(EHEC O157∶H7)37℃共培养。最后采用系列稀释克隆计数法观察干扰Core 2和Core 4 O-型糖链合成的C2GnT-2的HT-29细胞对细菌黏附及侵袭的影响。结果成功筛选获得shRNA-C2GnT-2及shRNA-Ctr稳定转染的HT-29细胞。Real-time PCR和Western blot检测证实干扰质粒能够有效地抑制HT-29细胞内C2GnT-2的mRNA及蛋白水平表达(P<0.01),黏附于shRNA-C2GnT-2/HT-29细胞表面的EPEC或EHEC O157∶H7的数量较对照细胞显著减少(P<0.01,P<0.05),而侵袭入shRNA-C2GnT-2/HT-29细胞内的EPEC或EHEC O157∶H7的数量较对照细胞显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论 Core 2和Core 4 O-型糖链参与了肠上皮细胞细菌的黏附与侵袭。
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