t-PA在昆虫细胞中的表达

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将含完整阅读框架的人t-PA(tissue-type plasminogen activator, t-PA)cDNA克隆至昆虫细胞表达转移载体pBacPAK8中,获得重组质粒pBac-tPA.应用脂质体共转染法,将pBac-tPA和线性化杆状病毒BacPAK6 DNA共转染Tn-5B-1昆虫细胞.经空斑筛选获得11株重组病毒.经PCR鉴定与生物活性测定,获得一株高效表达t-PA的重组病毒BactPA3.t-PA表达活性在感染(MOI≈10)后72 h左右达到最高,为3.04×103 IU/mL.经SDS-PAGE纤维蛋白自显影分析,相对分子质量为68 000左右.
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