【摘 要】
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目的原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。方法合成HAdV-7DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Westernblotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行
【机 构】
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国家儿童医学中心 国家呼吸系统临床医学研究中心 首都医科大学附属北京儿童医院 儿科重大疾病研究教育部重点实验室 中国医学科学院儿童危重感染诊治创新单元 儿童呼吸道感染性疾病研究北京市重点实验室 北京市
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目的原核表达人腺病毒（HAdV）7型DNA结合蛋白（DBP），制备DBP蛋白多克隆抗体。
方法合成HAdV-7 DBP基因并克隆至pET30a载体，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导进行原核表达。经镍离子金属螯合层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体，使用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定该抗体效价；使用Western blotting方法与间接免疫荧光方法（IFA）检测抗体特异性。以rDBP包被ELISA反应板使用间接ELISA对HAdV感染儿童急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体进行检测。
结果成功构建HAdV-7 DBP原核表达载体，表达的重组DBP蛋白经镍柱亲和层析纯化后纯度>95%，间接ELISA方法测得制备的多克隆抗血清的抗体效价为1∶1 024 000，Western blotting方法和IFA方法显示该抗体具有较高的特异性，间接ELISA方法检测HAdV感染儿童 急性期血清中抗DBP蛋白IgM和IgG抗体的阳性率分别为50.0%（19/38）和63.2%（24/38）。
结论成功构建HAdV-7 DBP蛋白的原达表达载体，获得了HAdV-7型DBP重组蛋白和高效价的兔多克隆抗体。
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