【摘 要】
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目的 将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)导入肝癌耐药细胞,干扰多药耐药(MDRl)基因后,观察其对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响。方法使用浓度梯度法制作sMMC-7721耐阿霉素细胞株(SMMC-7721/ADM),阿霉素浓度从0.1~2.0ms/L;转染siRNA(浓度25、50、75nmo/L)沉默此耐药株MDRl基因;转染后24、48、72h用定量逆转录.聚合酶链反应(qRT.PCR)检
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,广州510120,中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科,广州510120,中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,广州510120,中山大学孙逸仙纪念医院肝胆外科,广州510120,
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目的 将表达特异性的小干扰RNA(siRNA)导入肝癌耐药细胞,干扰多药耐药(MDRl)基因后,观察其对肝癌耐药细胞化疗敏感性的影响。方法使用浓度梯度法制作sMMC-7721耐阿霉素细胞株(SMMC-7721/ADM),阿霉素浓度从0.1~2.0ms/L;转染siRNA(浓度25、50、75nmo/L)沉默此耐药株MDRl基因;转染后24、48、72h用定量逆转录.聚合酶链反应(qRT.PCR)检测各组细胞MDRl的mRNA表达水平;siRNA(浓度50nmoVL)转染后48h,行噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞对化疗药物的敏感性,计算各药物的半数抑制浓度(IC50)和耐药系数(RI);流式细胞仪(FCM)检测细胞对阿霉素(浓度0.2mg/L)的凋亡。Westernblot检测蛋白表达含量。结果SMMC-7721/ADM对阿霉素、5.氟尿嘧啶(5.Fu)、长春新碱、奥沙利铂的RI为25.43、68.32、39.17、18.31。siRNA转染沉默MDRl基因后,发现其对上述药物的RI为5.01、17.04、4.96、1.62;qRT.PCR发现其MDRlmRNA表达量显著降低(P〈0.05);Westernblot显示其MDRl表达产物P—gp蛋白显著降低(P〈0.05);FCM发现加入阿霉素后,其细胞凋亡指数显著大于沉默前(P〈0.05)。结论用siRNA沉默SMMC-7721/ADM的MDRl基因后,SMMC-7721/ADM对化疗药的敏感性显著增加。MDRl基因与SMMC-7721肝癌细胞的多药耐药性显著相关,可通过沉默其MDRl基因来提高耐药肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。
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