【摘 要】
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构建了融合表达肠激酶轻链(EKLC)的基因工程大肠杆菌,将该菌于37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(OD600)达到0.5~0.6时加入最终浓度为0.4 mmol/L的IPTG并
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（30370039）.
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构建了融合表达肠激酶轻链(EKLC)的基因工程大肠杆菌,将该菌于37℃在含30 mg/L卡那霉素的LB培养基中培养,当细胞密度(OD600)达到0.5~0.6时加入最终浓度为0.4 mmol/L的IPTG并降温至26℃进行诱导表达,4 h后目的蛋白质的表达量可达菌体总蛋白质的40%以上,但所表达的重组产物大多以包涵体形式存在于菌体中。利用产物N端携带6个组氨酸标签与金属螯合层析介质中镍离子的亲和性,应用镍离子金属螯和层析对样品包涵体进行了纯化和复性研究。实验结果表明,在变性条件下纯化的样品在柱上不经洗脱,直接用复性液洗涤6 h,可以使EKLC在得到提纯的同时实现复性,得到了电泳纯度为96%的具有生物活性的EKLC,最高活性为712 U。
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