【摘 要】
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将人胰岛素原基因序列(human proinsulin,PI)经密码子优化后与Trx A蛋白融合表达,构建原核表达载体Trx A-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、Trans B(DE3)和Rosetta-gami
【机 构】
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山东省农业科学院生物技术研究中心; 山东省农作物种质资源中心; 山东省农业科学院研究生教育中心;
【基金项目】
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国家国际科技合作专项资助项目(2012DFA30450);山东省自然科学基金资助项目(ZR2014CQ043);山东省农业科学院青年科研基金资助项目(2014QNZ05);山东大学微生物技术国家重点实验室开放课题资助项目(M2014-01)
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将人胰岛素原基因序列(human proinsulin,PI)经密码子优化后与Trx A蛋白融合表达,构建原核表达载体Trx A-PI转入不同大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)、Trans B(DE3)和Rosetta-gami(DE3)中。SDS-PAGE显示融合蛋白在3种表达菌株中均有表达,在Rosetta-gami(DE3)中表达量最高,是普通大肠杆菌BL21(DE3)表达量的10倍。通过优化诱导温度等发酵条件,可溶性重组融合蛋白Trx A-PI在Rosetta-gami(DE3)菌株中表达量为3.5 g/L,比未优化时提高约10倍。Trx A-PI用肠激酶酶切后,利用His Trap FF柱分离纯化PI,经Western-blot检测重组PI具有免疫原性。
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