【摘 要】
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目的肺癌细胞株侧群(side poulation,SP)细胞的分选及干细胞特性的鉴定。方法选择肺癌细胞株SK-MES-1和NCI-H460,采用流式细胞仪分选SP和非SP(non-SP,NSP)细胞,分别接种于正
【基金项目】
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廊坊市科技支撑计划项目(完全自筹式)(2016013176)
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目的肺癌细胞株侧群(side poulation,SP)细胞的分选及干细胞特性的鉴定。方法选择肺癌细胞株SK-MES-1和NCI-H460,采用流式细胞仪分选SP和非SP(non-SP,NSP)细胞,分别接种于正常培养液和干细胞培养液中培养并传代,观察细胞表型和分化能力。电子显微镜观察细胞的超微结构。免疫荧光检测干细胞标志物CD44的表达。Cell counting kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力。集落形成、transwell侵袭实验和裸鼠成瘤实验明确细胞的恶性程度。结果初次分选SK-MES-1和NCI-H460细胞株SP和NSP百分比以及再纯化百分比之间比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。2种细胞株的SP和NSP细胞在干细胞培养液中均不能形成干细胞球,但增殖速度加快。SP细胞呈集聚生长,NSP细胞呈接触抑制的单层生长。SP细胞培养至第5代时,细胞表型变化不明显;NSP细胞第5代出现混杂表型。电子显微镜下SP细胞核质比较高,NSP细胞核质比低。SK-MES-1和NCIH460细胞株SP细胞可高表达CD44,组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CCK-8法检测显示,SK-MES-1和NCI-H460细胞株SP细胞第2、5和7天的吸光度均高于NSP细胞,差异均具有统计学意义(均P<0.05)。SKMES-1和NCI-H460细胞株SP细胞克隆数和克隆形成率高于NSP细胞,侵袭过膜的细胞数增加,裸鼠成瘤数增多(均P<0.05);均无转移灶,瘤体HE和免疫组织化学染色证实为典型肺癌细胞。结论肺癌细胞株SP细胞具有干细胞特性,参与肿瘤的增殖、分化、侵袭和成瘤过程。
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