【摘 要】
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目的建立能稳定且高水平表达人睫状神经营养因子(CNTF)的永久细胞株.方法采用阳离子脂质体介导CNTF表达质粒转染C2C12、NIH3T3、HLF、CRL-2302细胞,经氨甲喋呤筛选出抗性克隆
【机 构】
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上海市第一人民医院中心实验室,上海市第一人民医院眼科
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目的建立能稳定且高水平表达人睫状神经营养因子(CNTF)的永久细胞株.方法采用阳离子脂质体介导CNTF表达质粒转染C2C12、NIH3T3、HLF、CRL-2302细胞,经氨甲喋呤筛选出抗性克隆后,分别采用原位杂交检测细胞中CNTFmRNA的表达,采用免疫组织化学染色、Western blot方法检测细胞浆中CNTF蛋白质的表达,采用ELISA法检测培养液中CNTF的分泌水平.结果不同的克隆产生和分泌CNTF的能力不同,但其中产生和分泌CNTF能力最强的克隆其培养液中CNTF的质量浓度分别是C2C12-C
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