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【中图分类号】R28 【文献标识码】A 【文章编号】2107-2306（2021）06-129-01
一.品种的基本情况
中药材赤芍是毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍 Paeonia veitchiiLynch的干燥根，具有清热京血，散瘀镇痛。用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，癓瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。芍药苷为其主要活性成分药理研究表明该药有抗血栓形成作用、能显著降低重型肝炎患者血清内毒素及血清肿瘤坏死因子，改善肝脏生化指标的作用，此外尚具有镇静、镇痛、抗惊厥、抗炎及抗肿瘤等活性。赤芍在临床应用广泛，许多中成药制剂中都有赤芍成分，剂型有汤剂、片剂、颗粒剂、合剂等，因此赤芍药材的质量直接影响众多成药的质量，需严加把控。
二.探索性研究的目的
中药赤芍在《中国药典》2020年版一部赤芍项下鉴别（2）的薄层色谱鉴别试验中，只选择了芍药苷作为对照品，而芍药苷的来源包括毛莨科植物芍药根、牡丹根、紫牡丹根，所以选用对照药材对赤芍品种的判断专属性更强。
三.本次探索性研究实验的样品概况
本次试验共抽取37家企业生产的47批次样品，分布情况如下表格
四.开展的探索性研究
（一）对照药材的选择与处理方法
按《中国药典》2020年版一部赤芍项下鉴别（2）规定：取本品粉末0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法通则（0502）试验，吸取上述两种溶液个4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同的蓝紫色斑点。
以上方法的实验中47批次赤芍均出现了与对照品相应位置上的蓝紫色斑点，而且还出现了很多其它斑点，所以此方法应该能提出赤芍药材饮片的更多成分，用对照药材做薄层专属性会更强。以上方法中“滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解”，的步骤中，考虑溶剂相同情况下不蒸干，直接用滤液作为供试品溶液，省略提取步骤，也作为了本次探索研究方向。
中药材赤芍是毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍 Paeonia veitchiiLynch的干燥根，所以对照药材选择了赤芍对照药材和赤芍（川赤芍）对照药材。
在《中国药典》2015年版一部益脑宁片检验鉴别（3）项下，赤芍对照药材提取如下：取赤芍对照药材1g，加水饱和正丁醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
参考了以上两种提取方法和赤芍药材的来源，用正丁醇提取的赤芍对照药材，用乙醇提取，过滤未经蒸干，溶解的47批次赤芍样品和赤芍对照药材，赤芍（川赤芍）对照药材，芍药苷对照品溶液及空白溶液点与同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。
图中起点上的1、2、3、4、9、10、12为本次专项抽验的样品，5为正丁醇提取的赤芍对照药材，6为乙醇提取的赤芍对照药材，7为乙醇提取的对照药材，8为芍药苷对照品，11为空白溶液。
5、6、7、8、9起点展开后有共同峰一个蓝色斑点1。
5、6、7、9起点展开后都有相应位置的1、2点。
5、6、7、9起点展开后都有相应位置的1、2、3、4点，其中5和9起点展开后出现的点的颜色一致，1为蓝紫色，2是红色，3是淡紫色，4是棕色。
实验后得出结论：赤芍对照药材和赤芍（川赤芍）对照药材都可以在赤芍药材饮片的薄层色谱鉴别中出现较好的重复性，和鉴别功能，赤芍（川赤芍）考虑到来源不能覆盖所有赤芍，所以选赤芍对照药材更为准确。赤芍对照药材的薄层色谱应用中，正丁醇提取的对照药材溶液出现斑点与药材色谱中相应的斑点数多，一致性强，但是操作繁琐，提取费时。乙醇提取的对照药材溶液操作简单快捷，且明显的红色与蓝紫色斑点特征能有效判断赤芍药材。
（二）薄层板的选择
在《中国药典》2020年版一部赤芍鉴别（2）项下的检验中未见荧光斑点，所以本次薄层色谱法的探索中选择硅胶G板和H板做对比实验。
点于G板的结果如图1。
点于H板后出现的薄层色谱，展开内容不明确，如下图
（三）点样量的选择
在《中国药典》2020年版一部赤芍鉴别（2）项下的检验中芍药苷对照品点4μl ，供试品4μl，本次探索性研究中，考虑未经过蒸干再溶解的浓缩过程，将对照品，对照药材及供试品均点6μl实验。结果如下图
图中从左到右分别为赤芍供试品，芍药苷对照品，赤芍对照药材，赤芍供试品。
可见图中两边的供试品分离不彻底，蓝紫色斑点厚重有重影，而对照品和对照药材分离的干净，斑点清晰。
从以上实验的经验中再将对照品，对照药材各6μl，样品4μl点于薄层板上，结果如图5，分离效果清晰明确。
（四）系统适应性
图3中基线原点至点1的距离为45mm，至点2的距离为63mm，展距为100mm，Rf1=45/100=0.45 ， Rf2=63/100=0.63符合《中国药典》2020年版四部通则0502规定的0.2～08之间为宜。
（五）结论：取赤芍药材或饮片粉末0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材作同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，。照薄层色谱法通则（0502）试验，吸取上述对照品溶液6μl，对照药材溶液6μl，供试品溶液4μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同的蓝紫色斑点，在与对照药材色谱相应的位置上应显相同颜色的蓝紫色半点与红色斑点。
五.实验结果
本次实验选取的47批次赤芍品种通过（五）结论的方法提取、展开、显色、晾干，得出的薄层色谱在与对照品色谱相应的位置上，都显相同的蓝紫色斑点，在与对照药材色谱相应的位置上都显相同颜色的蓝紫色斑点与红色斑点，数据证明简化实验步骤，加赤芍对照药材的薄层色谱法操作简单，专属性更强。
参考文献：
[1]《中国药典》2020年版一部
[2]《中国药典》2020年版四部
一.品种的基本情况
中药材赤芍是毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍 Paeonia veitchiiLynch的干燥根，具有清热京血，散瘀镇痛。用于热入营血，温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，癓瘕腹痛，跌扑损伤，痈肿疮疡。芍药苷为其主要活性成分药理研究表明该药有抗血栓形成作用、能显著降低重型肝炎患者血清内毒素及血清肿瘤坏死因子，改善肝脏生化指标的作用，此外尚具有镇静、镇痛、抗惊厥、抗炎及抗肿瘤等活性。赤芍在临床应用广泛，许多中成药制剂中都有赤芍成分，剂型有汤剂、片剂、颗粒剂、合剂等，因此赤芍药材的质量直接影响众多成药的质量，需严加把控。
二.探索性研究的目的
中药赤芍在《中国药典》2020年版一部赤芍项下鉴别（2）的薄层色谱鉴别试验中，只选择了芍药苷作为对照品，而芍药苷的来源包括毛莨科植物芍药根、牡丹根、紫牡丹根，所以选用对照药材对赤芍品种的判断专属性更强。
三.本次探索性研究实验的样品概况
本次试验共抽取37家企业生产的47批次样品，分布情况如下表格
四.开展的探索性研究
（一）对照药材的选择与处理方法
按《中国药典》2020年版一部赤芍项下鉴别（2）规定：取本品粉末0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法通则（0502）试验，吸取上述两种溶液个4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同的蓝紫色斑点。
以上方法的实验中47批次赤芍均出现了与对照品相应位置上的蓝紫色斑点，而且还出现了很多其它斑点，所以此方法应该能提出赤芍药材饮片的更多成分，用对照药材做薄层专属性会更强。以上方法中“滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解”，的步骤中，考虑溶剂相同情况下不蒸干，直接用滤液作为供试品溶液，省略提取步骤，也作为了本次探索研究方向。
中药材赤芍是毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍 Paeonia veitchiiLynch的干燥根，所以对照药材选择了赤芍对照药材和赤芍（川赤芍）对照药材。
在《中国药典》2015年版一部益脑宁片检验鉴别（3）项下，赤芍对照药材提取如下：取赤芍对照药材1g，加水饱和正丁醇20ml，超声处理20分钟，滤过，滤液用正丁醇饱和的水洗涤，弃去水洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。
参考了以上两种提取方法和赤芍药材的来源，用正丁醇提取的赤芍对照药材，用乙醇提取，过滤未经蒸干，溶解的47批次赤芍样品和赤芍对照药材，赤芍（川赤芍）对照药材，芍药苷对照品溶液及空白溶液点与同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。
图中起点上的1、2、3、4、9、10、12为本次专项抽验的样品，5为正丁醇提取的赤芍对照药材，6为乙醇提取的赤芍对照药材，7为乙醇提取的对照药材，8为芍药苷对照品，11为空白溶液。
5、6、7、8、9起点展开后有共同峰一个蓝色斑点1。
5、6、7、9起点展开后都有相应位置的1、2点。
5、6、7、9起点展开后都有相应位置的1、2、3、4点，其中5和9起点展开后出现的点的颜色一致，1为蓝紫色，2是红色，3是淡紫色，4是棕色。
实验后得出结论：赤芍对照药材和赤芍（川赤芍）对照药材都可以在赤芍药材饮片的薄层色谱鉴别中出现较好的重复性，和鉴别功能，赤芍（川赤芍）考虑到来源不能覆盖所有赤芍，所以选赤芍对照药材更为准确。赤芍对照药材的薄层色谱应用中，正丁醇提取的对照药材溶液出现斑点与药材色谱中相应的斑点数多，一致性强，但是操作繁琐，提取费时。乙醇提取的对照药材溶液操作简单快捷，且明显的红色与蓝紫色斑点特征能有效判断赤芍药材。
（二）薄层板的选择
在《中国药典》2020年版一部赤芍鉴别（2）项下的检验中未见荧光斑点，所以本次薄层色谱法的探索中选择硅胶G板和H板做对比实验。
点于G板的结果如图1。
点于H板后出现的薄层色谱，展开内容不明确，如下图
（三）点样量的选择
在《中国药典》2020年版一部赤芍鉴别（2）项下的检验中芍药苷对照品点4μl ，供试品4μl，本次探索性研究中，考虑未经过蒸干再溶解的浓缩过程，将对照品，对照药材及供试品均点6μl实验。结果如下图
图中从左到右分别为赤芍供试品，芍药苷对照品，赤芍对照药材，赤芍供试品。
可见图中两边的供试品分离不彻底，蓝紫色斑点厚重有重影，而对照品和对照药材分离的干净，斑点清晰。
从以上实验的经验中再将对照品，对照药材各6μl，样品4μl点于薄层板上，结果如图5，分离效果清晰明确。
（四）系统适应性
图3中基线原点至点1的距离为45mm，至点2的距离为63mm，展距为100mm，Rf1=45/100=0.45 ， Rf2=63/100=0.63符合《中国药典》2020年版四部通则0502规定的0.2～08之间为宜。
（五）结论：取赤芍药材或饮片粉末0.5g，加乙醇10ml，振摇5分钟，滤过，作为供试品溶液。另取赤芍对照药材作同法制成对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇制成每1mL含2mg的溶液，。照薄层色谱法通则（0502）试验，吸取上述对照品溶液6μl，对照药材溶液6μl，供试品溶液4μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（40：5：10：0.2）為展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，应显相同的蓝紫色斑点，在与对照药材色谱相应的位置上应显相同颜色的蓝紫色半点与红色斑点。
五.实验结果
本次实验选取的47批次赤芍品种通过（五）结论的方法提取、展开、显色、晾干，得出的薄层色谱在与对照品色谱相应的位置上，都显相同的蓝紫色斑点，在与对照药材色谱相应的位置上都显相同颜色的蓝紫色斑点与红色斑点，数据证明简化实验步骤，加赤芍对照药材的薄层色谱法操作简单，专属性更强。
参考文献：
[1]《中国药典》2020年版一部
[2]《中国药典》2020年版四部