【摘 要】
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目的探讨Bcl-xl对肿瘤坏死因子α(TNFα)介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡的影响. 方法将iκBα负性突变体质粒pmiκB与绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒pEGFP-C1,pmiκB、pBcl-
【机 构】
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广州,美国贝勒医学院细胞与分子生物学系
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目的探讨Bcl-xl对肿瘤坏死因子α(TNFα)介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡的影响. 方法将iκBα负性突变体质粒pmiκB与绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒pEGFP-C1,pmiκB、pBcl-xl/HA与pEGFP-C1分别共转染HeLa细胞;将pBcl-xl/HA转染核因子-κB(NF-κB)/p65基因敲除的p65-/-MEF细胞,并用嘌呤霉素筛选及western blot鉴定获得稳定表达Bcl-xl的细胞系p65-/-/Bcl-xlMEF.用TNFα处理HeLa/miκB、HeLa/miκB/Bcl-xl细胞以及p65-/-MEF、p65-/-/Bcl-xlMEF细胞,并在显微镜下观察细胞形态变化、台盼蓝染色计算死亡细胞以检测各组细胞凋亡情况;采用western blot检测凋亡信号通路中caspase 8活化及腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解情况. 结果单独转染pmiκB的HeLa细胞,TNFα诱导的细胞凋亡明显,表现为细胞变圆、脱落、死亡,而pBcl-xl/HA与pmiκB共转染的HeLa细胞,TNFα处理后未见细胞凋亡.p65-/-MEF细胞经TNFα处理发生凋亡,该作用在TNFα处理后4h即可出现,处理12h后细胞死亡率为90%,而在表达Bcl-xl的p65-/-/Bcl-xlMEF细胞,TNFα处理24h也未见细胞凋亡或死亡发生.Western blot检测表明单独转染pmiκB的HeLa细胞,TNFα诱导了caspase 8裂解活化及PARP裂解,而pBcl-xl/HA与pmiκB共转染、表达Bcl-xl的HeLa细胞,TNFα诱导的caspase 8裂解活化及PARP裂解被阻断. 结论在NF-κB被抑制的实验细胞系统,Bcl-xl能阻断TNFα介导的细胞凋亡信号通路以及细胞凋亡,这对于进一步研究TNFα相关疾病发生机制及治疗措施有重要价值.
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