【摘 要】
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肝细胞癌(HCC)是最常见的癌症之一.UHRF2是一种肿瘤抑制因子,在细胞周期,泛素-蛋白酶体系统和表观遗传中都起重要的作用.为了探究在肝癌细胞(HepG2)和正常肝细胞(L02)中UHRF2
【机 构】
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重庆医科大学基础医学院,重庆,400016
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肝细胞癌(HCC)是最常见的癌症之一.UHRF2是一种肿瘤抑制因子,在细胞周期,泛素-蛋白酶体系统和表观遗传中都起重要的作用.为了探究在肝癌细胞(HepG2)和正常肝细胞(L02)中UHRF2的磷酸化修饰差异位点,以及研究UHRF2的磷酸化修饰差异位点对其生物学功能的影响.我们通过LC-MS-MS技术检测到UHRF2的第643位丝氨酸(S643)和第683位丝氨酸(S683)中的磷酸化修饰水平在HepG2和L02细胞中差异显著;为了研究各磷酸化位点的对细胞生物学功能的影响,我们构建3种UHRF2磷酸化位点突变质粒,通过DNA测序技术检测突变质粒的序列,并通过WB技术检测到UHRF2磷酸化位点突变体在HepG2和L02细胞中能够正常表达;IF实验证明UHRF2的磷酸化位点突变不影响UHRF2在细胞中的亚定位;WB实验检测UHRF2突变体对H3K9ac,H3K14ac的表达有影响;体内泛素化实验结果表明UHRF2的磷酸化影响UHRF2的泛素化能力.本研究表明在正常肝细胞(L02)和肝癌细胞(HepG2)中,UHRF2存在磷酸化修饰差异位点,UHRF2的磷酸化位点不影响其自身的亚定位,但对其自身的泛素化能力,以及H3K9ac和H3K14ac的表达产生影响.
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