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【摘要】 目的：研究中药地黄的多糖类成分的开发和利用，比较地黄炮制前后还原糖含量的变化。方法：应用乙醇沉法提取地黄中多糖类成分，全自动还原糖测定仪，测定熟地黄样品中还原糖含量。结果：生地黄和熟地黄中粗多糖的提取率分别为18.65％和32.18％，还原糖含量高压蒸制在一定时间范围内随着蒸制时间的延长而增加，还原糖含量最高在高压蒸制7小时。结论：中药地黄炮制前后粗多糖含量存在差异，地黄最佳炮制方法应为高压蒸制7 h。
【关键词】 生地黄；熟地黄；粗多糖；还原糖；提取
地黄是属玄参科植物，秋季采挖地黄的块根，除去泥沙、须根及芦头，鲜用；或者将地黄新鲜的块根小火烘焙至约八成干燥。前者称之为“鲜地黄”，后者称之为“生地黄”[1]。 生地黄经过炮制加工成熟地黄，其化学成分、药理作用均发生了变化，具有益精填髓、滋阴补血的功效，研究显示其中还原糖含量的变化较显著[2]。为了获得比较有效的还原糖提取效率，本研究开展了熟地黄粗多糖提取、还原糖含量测定研究。现报道如下：
1 研究仪器与材料
722型可见光分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；FA2004A型电子天平（购自上海精天电子仪器有限公司）；RT-01中药粉碎机（购自广东省广州市大祥药材器械厂）；SGD-4型全自动还原糖测定仪（购自山东省科学院生物中心）；1810-B型石英自动双重纯水蒸馏器（购自西安常仪生化仪器有限公司）；HH-6型数显恒温水浴锅（购自上海康路仪器设备有限公司）；GX15ML离心沉淀器（金坛市盛威实验仪器厂）；Eppendorf移液器（芬兰Thermo 100-1000μl）；HVE-50医学专用高压灭菌锅(0-0.25MPa，0-138℃，购自上海天呈科技有限公司)；0.45μm微孔滤膜。
生地黄(生产批号20100702)与熟地黄(生产批号20100802)，均购自广东省东莞国药集团药材有限公司；乙醇；无水葡萄糖(生产批号11083-201005，中国药品生物制品检定所)；硫酸铜；次甲基蓝；酒石酸钾钠；亚铁氰化钾；氢氧化钠；盐酸等试剂均为分析纯。
2 试验方法
2.1 地黄的高压蒸制炮制 选取生地黄400 g，随机等分为A、B、C、D4个组，每组100 g，置于烧杯中，各加适量清水浸润60min，放入医学专用高压灭菌锅内，待其压力升到0.125 MPa(温度为125℃)后，蒸制时间为：A组5 h、B组7 h、C组9 h、D组11h，取出并晾干，备用。
2.2 地黄的粗多糖提取 称取炮制前后的地黄，即生地黄和熟地黄各10g，精密称定，均用90％乙醇渗透，醇提后的地黄，用80℃蒸馏水回流提取3 h，过滤后用90％乙醇洗涤药渣，共3次，合并回收滤液，浓缩至100 ml，摇匀，加95％乙醇调定含醇量为80％，置夜，抽滤，分别用乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，试剂挥散至干后，即可得到炮制前后地黄的无定型粗多糖粉末。精密称取得到的两种粗多糖各0.5g，用蒸馏水溶解，稀释至刻度，制成浓度为100μg/ml的供试品溶液。用蒸馏水溶解无水葡萄糖后定容，配成浓度为116μg/ml的对照溶液，用722型可见分光光度计于490nm处测定吸光度，制备标准曲线。测定炮制前后地黄的粗多糖提取率。
2.3 还原糖含量的测定 按文献说明[3]，配制斐林试剂和葡萄糖效准溶液备用。精密称定生地黄和熟地黄无定型粗多糖粉末各2.0g，蒸馏水溶解后，移至50mL定量的容量瓶中，定容至刻度处并混匀。取上述溶液10mL置于离心管中高速离心，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液备用。分别精密吸取供试品溶液各0.5mL，注入全自动还原糖测定仪的反应池中，测定还原糖含量。
2.4 统计学处理 应用SPSS 15.0软件，计量资料比较采用独立样本t检验，计数资料比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
3 试验结果
3.1 炮制前后地黄的粗多糖提取 由表1结果可知，炮制前地黄，即生地黄的粗多糖提取率明显较炮制后地黄，即熟地黄低(P<0.05)，而生地黄的总糖的含量明显较熟地黄高(P<0.05)。
表1炮制前后地黄的粗多糖提取(n=3)
注：与生地黄组相比，#P>0.05，*P<0.05。
3.2还原糖含量的测定 由表2结果可知，生地黄的还原糖含量较熟地黄明显降低(P<0.05)，而两组的不同高压蒸制时间还原糖含量中以蒸制7h时最高，分别为：30.5%、39.5%。
表2不同高压蒸制时间还原糖含量的测定
注：与生地黄组相比，*P<0.05。
4 讨论
地黄的炮制目的主要是使药性由生地黄的寒性转为熟地黄的温性，味由甘苦转为甘；其临床功效由清热凉血转为补血养阴。因而地黄炮制前后在药性、药效上有着极大的差异，因此，地黄的炮制加工工艺对地黄饮片的质量以及患者的用药安全有着重要影响，故必需要对炮制过程加以重视。地黄的炮制方法并无统一方法，2005年版《中华人民共和国药典》规定地黄炮制可以采用蒸法、炖法等。本研究探讨应用高压蒸制炮制方法对生地黄和熟地黄的粗多糖提取以及对还原糖含量的影响。
本实验显示，粗多糖的提取率熟地黄明显高于生地黄，而粗多糖中总糖含量生地黄明显高于熟地黄。推究其原因可能与以下的原因相关：①地黄炮制的过程中，地黄中的成分发生了较大变化，使获得的的熟地黄粗多糖含有较多的杂质。②在相同条件下，生地黄多糖提取不完全，熟地黄多糖提取较完全。③地黄炮制过程中，部分粗多糖水解成单糖和低聚糖，因此粗多糖中总糖含量熟地黄较生地黄偏低。
本实验通过对样品的测定发现，地黄在高压蒸制过程中，在一定时间和一定蒸晒次数范围内还原糖含量随着蒸制时间的延长和蒸晒次的增多而增加。高压蒸制7 h时生地黄和熟地黄的还原糖含量都是最高，之前与随后含量有所降低。因而采用高压蒸制来炮制地黄，最佳炮制方法应为高压蒸制7 h。
参考文献
[1] 叶定江，张世臣. 中药炮制学[M].第二版．北京：人民卫生出版社，1999：289-291．
[2] 纪耀华，孙摇莹，高松红，等.地黄炮制前后总多糖含量的比较[J].中医药信息，1999，16(5)：16-18．
[3] 李侠，赵新菊，曹立云，等.含糖透析液对维持性血液透析患者心率变异性和血压的影响[J].中国血液净化杂志，20l0，9(3)：138-141
【关键词】 生地黄；熟地黄；粗多糖；还原糖；提取
地黄是属玄参科植物，秋季采挖地黄的块根，除去泥沙、须根及芦头，鲜用；或者将地黄新鲜的块根小火烘焙至约八成干燥。前者称之为“鲜地黄”，后者称之为“生地黄”[1]。 生地黄经过炮制加工成熟地黄，其化学成分、药理作用均发生了变化，具有益精填髓、滋阴补血的功效，研究显示其中还原糖含量的变化较显著[2]。为了获得比较有效的还原糖提取效率，本研究开展了熟地黄粗多糖提取、还原糖含量测定研究。现报道如下：
1 研究仪器与材料
722型可见光分光光度计(上海光谱仪器有限公司)；FA2004A型电子天平（购自上海精天电子仪器有限公司）；RT-01中药粉碎机（购自广东省广州市大祥药材器械厂）；SGD-4型全自动还原糖测定仪（购自山东省科学院生物中心）；1810-B型石英自动双重纯水蒸馏器（购自西安常仪生化仪器有限公司）；HH-6型数显恒温水浴锅（购自上海康路仪器设备有限公司）；GX15ML离心沉淀器（金坛市盛威实验仪器厂）；Eppendorf移液器（芬兰Thermo 100-1000μl）；HVE-50医学专用高压灭菌锅(0-0.25MPa，0-138℃，购自上海天呈科技有限公司)；0.45μm微孔滤膜。
生地黄(生产批号20100702)与熟地黄(生产批号20100802)，均购自广东省东莞国药集团药材有限公司；乙醇；无水葡萄糖(生产批号11083-201005，中国药品生物制品检定所)；硫酸铜；次甲基蓝；酒石酸钾钠；亚铁氰化钾；氢氧化钠；盐酸等试剂均为分析纯。
2 试验方法
2.1 地黄的高压蒸制炮制 选取生地黄400 g，随机等分为A、B、C、D4个组，每组100 g，置于烧杯中，各加适量清水浸润60min，放入医学专用高压灭菌锅内，待其压力升到0.125 MPa(温度为125℃)后，蒸制时间为：A组5 h、B组7 h、C组9 h、D组11h，取出并晾干，备用。
2.2 地黄的粗多糖提取 称取炮制前后的地黄，即生地黄和熟地黄各10g，精密称定，均用90％乙醇渗透，醇提后的地黄，用80℃蒸馏水回流提取3 h，过滤后用90％乙醇洗涤药渣，共3次，合并回收滤液，浓缩至100 ml，摇匀，加95％乙醇调定含醇量为80％，置夜，抽滤，分别用乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，试剂挥散至干后，即可得到炮制前后地黄的无定型粗多糖粉末。精密称取得到的两种粗多糖各0.5g，用蒸馏水溶解，稀释至刻度，制成浓度为100μg/ml的供试品溶液。用蒸馏水溶解无水葡萄糖后定容，配成浓度为116μg/ml的对照溶液，用722型可见分光光度计于490nm处测定吸光度，制备标准曲线。测定炮制前后地黄的粗多糖提取率。
2.3 还原糖含量的测定 按文献说明[3]，配制斐林试剂和葡萄糖效准溶液备用。精密称定生地黄和熟地黄无定型粗多糖粉末各2.0g，蒸馏水溶解后，移至50mL定量的容量瓶中，定容至刻度处并混匀。取上述溶液10mL置于离心管中高速离心，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，作为供试品溶液备用。分别精密吸取供试品溶液各0.5mL，注入全自动还原糖测定仪的反应池中，测定还原糖含量。
2.4 统计学处理 应用SPSS 15.0软件，计量资料比较采用独立样本t检验，计数资料比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
3 试验结果
3.1 炮制前后地黄的粗多糖提取 由表1结果可知，炮制前地黄，即生地黄的粗多糖提取率明显较炮制后地黄，即熟地黄低(P<0.05)，而生地黄的总糖的含量明显较熟地黄高(P<0.05)。
表1炮制前后地黄的粗多糖提取(n=3)
注：与生地黄组相比，#P>0.05，*P<0.05。
3.2还原糖含量的测定 由表2结果可知，生地黄的还原糖含量较熟地黄明显降低(P<0.05)，而两组的不同高压蒸制时间还原糖含量中以蒸制7h时最高，分别为：30.5%、39.5%。
表2不同高压蒸制时间还原糖含量的测定
注：与生地黄组相比，*P<0.05。
4 讨论
地黄的炮制目的主要是使药性由生地黄的寒性转为熟地黄的温性，味由甘苦转为甘；其临床功效由清热凉血转为补血养阴。因而地黄炮制前后在药性、药效上有着极大的差异，因此，地黄的炮制加工工艺对地黄饮片的质量以及患者的用药安全有着重要影响，故必需要对炮制过程加以重视。地黄的炮制方法并无统一方法，2005年版《中华人民共和国药典》规定地黄炮制可以采用蒸法、炖法等。本研究探讨应用高压蒸制炮制方法对生地黄和熟地黄的粗多糖提取以及对还原糖含量的影响。
本实验显示，粗多糖的提取率熟地黄明显高于生地黄，而粗多糖中总糖含量生地黄明显高于熟地黄。推究其原因可能与以下的原因相关：①地黄炮制的过程中，地黄中的成分发生了较大变化，使获得的的熟地黄粗多糖含有较多的杂质。②在相同条件下，生地黄多糖提取不完全，熟地黄多糖提取较完全。③地黄炮制过程中，部分粗多糖水解成单糖和低聚糖，因此粗多糖中总糖含量熟地黄较生地黄偏低。
本实验通过对样品的测定发现，地黄在高压蒸制过程中，在一定时间和一定蒸晒次数范围内还原糖含量随着蒸制时间的延长和蒸晒次的增多而增加。高压蒸制7 h时生地黄和熟地黄的还原糖含量都是最高，之前与随后含量有所降低。因而采用高压蒸制来炮制地黄，最佳炮制方法应为高压蒸制7 h。
参考文献
[1] 叶定江，张世臣. 中药炮制学[M].第二版．北京：人民卫生出版社，1999：289-291．
[2] 纪耀华，孙摇莹，高松红，等.地黄炮制前后总多糖含量的比较[J].中医药信息，1999，16(5)：16-18．
[3] 李侠，赵新菊，曹立云，等.含糖透析液对维持性血液透析患者心率变异性和血压的影响[J].中国血液净化杂志，20l0，9(3)：138-141