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[摘 要]HPLC法又叫做高效液相色谱法，本次试验用这种方法对注射用头孢米诺钠的有关物质和含量进行了测定，其目的就是为了确定该类药物中各种物质及其含量。并为临床用药提供依据和保障。目前，我國的医药检测制度改革不断深入，人们对于药品要求也在不断增多，药品疗效以及可靠性，已经成为了一个被社会各界所广泛关注的问题。为了使药品在安全的同时又能够保障疗效，严格对药品成分及其含量进行测定，是非常必要的，文章研究和分析了HPLC法测定注射用头孢米诺钠有关物质及含量试验的整个过程，从而证明了此法是可靠，并且方便的测定方法，能够在注射用头孢米诺钠的有关物质及含量测定中应用。
[关键词]高效液相色谱 头孢米诺钠 注射液
中图分类号：R541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0397-01
引言
头孢米诺钠是一种半合成的头孢霉素衍生物，其药性与三代头孢霉素基本一致，具有水溶性。通常在治疗大肠杆菌、链球菌、流感嗜血杆菌、等方面有显著疗效，其抗菌性强，因此在临床得到了很好的应用和推广。
一、头孢米诺钠
头孢米诺为头霉素类抗生素，其对β-内酰胺酶高度稳定。该品与β-内酰胺抗生素作用点青霉素结合蛋白有很强的亲和性，能抑制细胞壁的生物合成，并能结合于肽多糖，抑制肽多糖与脂蛋白结合而促进溶菌。此外，该品还能与革兰阴性菌特有的外膜脂蛋白的二氨基庚二酸结合，在短时间内显示其很强的双重杀菌作用。
二、仪器与试药
岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；岛津SPD-10Avp紫外检测器；N2000色谱工作站；FA1104电子天平；PHS-3C型酸度计。头孢米诺对照品，注射用头孢米诺钠。甲醇、四氢呋喃为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为重蒸馏水。
方法与结果
1.色谱条件
色谱柱为ShimpackVP-ODS（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为醋酸溶液（取10mL冰醋酸，加水980mL）-甲醇-四氢呋喃（990∶5∶5）。检测波长为254nm；柱温25℃；头孢米诺的保留时间约为18min。理论板数按头孢米诺峰计应不低于3000。同时精密称取头孢米诺对照品及邻硝基苯甲酸适量，用流动相稀释成每1mL中约含头孢米诺1mg和含邻硝基苯甲酸25μg的混合溶液，进样测试，头孢米诺与邻硝基苯甲酸依次流出，其峰的分离度应不小于5。另取头孢米诺对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱峰，计算数次进样结果，其相对标准差（RSD）不得过2.0%。
2.含量测定
2.1线性及范围：精密称取头孢米诺对照品129mg，置50mL量瓶中，加水振摇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液2、3、4、5、6、7、8mL，分别置10mL量瓶中，加水稀释，摇匀。取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归。结果表明：在0.4003～1.6013mg·mL-1浓度范围内，本法的线性良好。
2.2回收率试验：取头孢米诺对照品52mg、65mg、78mg各3份，精密称定，分别置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取头孢米诺对照品65mg，精密称定，置50mL量瓶中，加水振摇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算回收率（见表1）。
2.3重复性试验：在同批均质样品中取6份样品，每份68mg，置50mL量瓶中，照上述含量测定方法分别测定每份样品的含量，测得含量平均值为99.8±0.31，RSD=0.31。
2.4溶液稳定性试验：取回收率项下的低、中、高3个浓度的样品溶液分别于0、2、4、6、8、12、24h各进样20μL，计算RSD值，考察样品溶液的稳定性。测得低浓度样品峰面积RSD=3.53%、中浓度样品峰面积RSD=2.82%、高浓度样品峰面积RSD=3.08%，试验结果表明供试品溶液在24h内不稳定，应配制后2h内立即测定。
2.5含量测定方法：在进行含量测定时，实验人员需要严格按照要求取头孢米诺对照品和邻硝基苯甲酸，然后利用流动相将其稀释至要求，最后进样，峰分离度在≥5的范围内。另取对照品溶液20μL，通过液相色谱仪观察其色谱峰，多次进样，并记录其结果，相对标准差≤2.0%。测定方法：实验人员取该药物对照品一定量，超严密称定，与水相溶制成1mg的溶液，并且充分摇动均匀，以其为对照品的溶液，按照外标法算出头孢米诺含量。结果表明含量符合标准。
3.有关物质
3.1辅料干扰性试验：本品为头孢米诺钠粉末直接分装制成的无菌制剂，成品中无辅料。因此，不进行辅料干扰性试验。由系统适用性试验看出：头孢米诺峰与去邻硝基苯甲酸峰的分离度应符合规定，彼此不互相干扰。
3.2专属性：取头孢米诺钠原料药约100mg，置4500Lx强光照射4天、150℃高温下1h、稀盐酸中1h、稀氢氧化钠溶液中1h、酸性双氧水（双氧水-甲酸（2∶1））中1h，进行破坏性试验，同时做空白试验。将上述降解样品置100mL量瓶中，分别加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取头孢米诺钠原料药100mg，置10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，取上述溶液1mL置100mL量瓶中加水溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。再取供试品溶液和对照品溶液各20μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。结果表明：各降解产物在该色谱条件下均有一定的响应，各峰与主峰分离度良好，溶剂不干扰本法的测定。因此可采用本法作为注射用头孢米诺钠的有关物质检查法。
3.3系统适用性试验：需要同时进行头孢米诺与邻硝基苯基酸的称取，然后使用流动相将其稀释成1毫升的溶液，进样，峰分离在≤5左右。同时精密称取头孢米诺对照品及邻硝基苯甲酸适量，用流动相稀释成每1mL中约含头孢米诺1mg和含邻硝基苯甲酸25μg的混合溶液，进样测试，头孢米诺与邻硝基苯甲酸依次流出，其峰的分离度应不小于5。另取头孢米诺对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱峰，计算数次进样结果，RSD相对标准差不得过2%。试验结果表明，头孢米诺峰与邻硝基苯甲酸峰的分离度为8.110。
结束语：
经济的发展与科技的进步，使得我国药品行业有了更多的机遇，同时也面临着更加艰巨的挑战。人们生活水平不断提高的同时，患有各种疾病的几率也在不断攀升，市场对于药品的需求越来越多，在这样的形势下，药品检测制度不断完善和改革，对于药品的测定要求也越来越高，为了能够满足市场需求，保障人们的生命安全，强化药品测定过程中的规范操作，使用科学合理的测定方法，对药品残留物以及物质成分、含量进行严格计算，是非常必要的，文章主要利用HPLC法对头孢米诺钠的有关物质与含量，进行了测定，结果显示其物质含量合乎标准，在保障要药效的前提下，对人们身体无害。并且这种测定方法的操作性强，简单精确，值得信任。
参考文献：
[1] 江生，许昕，邹玉明，陈光春.高效液相色谱法测定替加氟片的含量和溶出度[J].中国药业.2012.
[2] 朱晓璐，林昀，李霞. 蒸发光散射-HPLC法测定硫酸妥布霉素注射液中的有关物质[J].中国药房.2012.
[关键词]高效液相色谱 头孢米诺钠 注射液
中图分类号：R541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0397-01
引言
头孢米诺钠是一种半合成的头孢霉素衍生物，其药性与三代头孢霉素基本一致，具有水溶性。通常在治疗大肠杆菌、链球菌、流感嗜血杆菌、等方面有显著疗效，其抗菌性强，因此在临床得到了很好的应用和推广。
一、头孢米诺钠
头孢米诺为头霉素类抗生素，其对β-内酰胺酶高度稳定。该品与β-内酰胺抗生素作用点青霉素结合蛋白有很强的亲和性，能抑制细胞壁的生物合成，并能结合于肽多糖，抑制肽多糖与脂蛋白结合而促进溶菌。此外，该品还能与革兰阴性菌特有的外膜脂蛋白的二氨基庚二酸结合，在短时间内显示其很强的双重杀菌作用。
二、仪器与试药
岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪；岛津SPD-10Avp紫外检测器；N2000色谱工作站；FA1104电子天平；PHS-3C型酸度计。头孢米诺对照品，注射用头孢米诺钠。甲醇、四氢呋喃为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为重蒸馏水。
方法与结果
1.色谱条件
色谱柱为ShimpackVP-ODS（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为醋酸溶液（取10mL冰醋酸，加水980mL）-甲醇-四氢呋喃（990∶5∶5）。检测波长为254nm；柱温25℃；头孢米诺的保留时间约为18min。理论板数按头孢米诺峰计应不低于3000。同时精密称取头孢米诺对照品及邻硝基苯甲酸适量，用流动相稀释成每1mL中约含头孢米诺1mg和含邻硝基苯甲酸25μg的混合溶液，进样测试，头孢米诺与邻硝基苯甲酸依次流出，其峰的分离度应不小于5。另取头孢米诺对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱峰，计算数次进样结果，其相对标准差（RSD）不得过2.0%。
2.含量测定
2.1线性及范围：精密称取头孢米诺对照品129mg，置50mL量瓶中，加水振摇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液2、3、4、5、6、7、8mL，分别置10mL量瓶中，加水稀释，摇匀。取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算峰面积。以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归。结果表明：在0.4003～1.6013mg·mL-1浓度范围内，本法的线性良好。
2.2回收率试验：取头孢米诺对照品52mg、65mg、78mg各3份，精密称定，分别置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取头孢米诺对照品65mg，精密称定，置50mL量瓶中，加水振摇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。取供试品溶液与对照品溶液各20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算回收率（见表1）。
2.3重复性试验：在同批均质样品中取6份样品，每份68mg，置50mL量瓶中，照上述含量测定方法分别测定每份样品的含量，测得含量平均值为99.8±0.31，RSD=0.31。
2.4溶液稳定性试验：取回收率项下的低、中、高3个浓度的样品溶液分别于0、2、4、6、8、12、24h各进样20μL，计算RSD值，考察样品溶液的稳定性。测得低浓度样品峰面积RSD=3.53%、中浓度样品峰面积RSD=2.82%、高浓度样品峰面积RSD=3.08%，试验结果表明供试品溶液在24h内不稳定，应配制后2h内立即测定。
2.5含量测定方法：在进行含量测定时，实验人员需要严格按照要求取头孢米诺对照品和邻硝基苯甲酸，然后利用流动相将其稀释至要求，最后进样，峰分离度在≥5的范围内。另取对照品溶液20μL，通过液相色谱仪观察其色谱峰，多次进样，并记录其结果，相对标准差≤2.0%。测定方法：实验人员取该药物对照品一定量，超严密称定，与水相溶制成1mg的溶液，并且充分摇动均匀，以其为对照品的溶液，按照外标法算出头孢米诺含量。结果表明含量符合标准。
3.有关物质
3.1辅料干扰性试验：本品为头孢米诺钠粉末直接分装制成的无菌制剂，成品中无辅料。因此，不进行辅料干扰性试验。由系统适用性试验看出：头孢米诺峰与去邻硝基苯甲酸峰的分离度应符合规定，彼此不互相干扰。
3.2专属性：取头孢米诺钠原料药约100mg，置4500Lx强光照射4天、150℃高温下1h、稀盐酸中1h、稀氢氧化钠溶液中1h、酸性双氧水（双氧水-甲酸（2∶1））中1h，进行破坏性试验，同时做空白试验。将上述降解样品置100mL量瓶中，分别加水溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。另取头孢米诺钠原料药100mg，置10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，取上述溶液1mL置100mL量瓶中加水溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。再取供试品溶液和对照品溶液各20μL分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。结果表明：各降解产物在该色谱条件下均有一定的响应，各峰与主峰分离度良好，溶剂不干扰本法的测定。因此可采用本法作为注射用头孢米诺钠的有关物质检查法。
3.3系统适用性试验：需要同时进行头孢米诺与邻硝基苯基酸的称取，然后使用流动相将其稀释成1毫升的溶液，进样，峰分离在≤5左右。同时精密称取头孢米诺对照品及邻硝基苯甲酸适量，用流动相稀释成每1mL中约含头孢米诺1mg和含邻硝基苯甲酸25μg的混合溶液，进样测试，头孢米诺与邻硝基苯甲酸依次流出，其峰的分离度应不小于5。另取头孢米诺对照品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱峰，计算数次进样结果，RSD相对标准差不得过2%。试验结果表明，头孢米诺峰与邻硝基苯甲酸峰的分离度为8.110。
结束语：
经济的发展与科技的进步，使得我国药品行业有了更多的机遇，同时也面临着更加艰巨的挑战。人们生活水平不断提高的同时，患有各种疾病的几率也在不断攀升，市场对于药品的需求越来越多，在这样的形势下，药品检测制度不断完善和改革，对于药品的测定要求也越来越高，为了能够满足市场需求，保障人们的生命安全，强化药品测定过程中的规范操作，使用科学合理的测定方法，对药品残留物以及物质成分、含量进行严格计算，是非常必要的，文章主要利用HPLC法对头孢米诺钠的有关物质与含量，进行了测定，结果显示其物质含量合乎标准，在保障要药效的前提下，对人们身体无害。并且这种测定方法的操作性强，简单精确，值得信任。
参考文献：
[1] 江生，许昕，邹玉明，陈光春.高效液相色谱法测定替加氟片的含量和溶出度[J].中国药业.2012.
[2] 朱晓璐，林昀，李霞. 蒸发光散射-HPLC法测定硫酸妥布霉素注射液中的有关物质[J].中国药房.2012.