【摘 要】
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室温下用50mmol/LCaCl_2处理根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以制备感受态细胞,然后经0℃冰浴及28℃热击处理,成功地将Ti质粒中间载体(>10kb)导入了根癌土壤农杆菌
【机 构】
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北京大学生命科学学院,北京大学生命科学学院,北京大学生命科学学院 北京 100871,北京 100871,北京 100871
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室温下用50mmol/LCaCl_2处理根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)以制备感受态细胞,然后经0℃冰浴及28℃热击处理,成功地将Ti质粒中间载体(>10kb)导入了根癌土壤农杆菌中。转化效率每个活细胞可达10~(-4)～10~(-5)转化子或10~6转化子/μgDNA。探讨了该菌细胞生长状态、CaCl_2滚滚浓度、温度、液氮、热击、复苏时间以及感受态细胞于4℃或—20℃(加15％甘油)下保存时间对根癌土壤杆菌转化的影响。
Agrobacterium tumefaciens was treated with 50 mmol / L NaCl at room temperature to prepare competent cells, and then the Ti plasmid intermediate vector (> 10 kb) was successfully introduced into the root soil soil by 0 ° C ice bath and 28 ° C heat shock treatment Agrobacterium. Transformation efficiency of each live cell up to 10 ~ (-4) ~ 10 ~ (-5) transformants or 10 ~ 6 transformants / g DNA. The effects of cell growth status, concentration of CaCl 2, temperature, liquid nitrogen, heat stroke, resuscitation time and storage time of competent cells on Agrobacterium tumefaciens transformation at 4 ℃ or -20 ℃ (plus 15% glycerol) were discussed. .
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