异源表达AtCKX2基因对番茄果实发育的影响

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番茄(Solanum lycopersicum)是世界上广泛种植的蔬菜之一,是研究呼吸跃变型果实的模式植物.各种植物激素参与调控番茄果实的生长发育过程.细胞分裂素能够促进果实的细胞分裂,使果实增大、增加果实重量、延缓果实衰老、提高果实产量等.为了研究内源细胞分裂素对番茄果实的影响,本实验构建了番茄果实特异性启动子Tfm7驱动拟南芥(Arabidopsis thaliana)细胞分裂素氧化酶2基因(cytokinin oxidase,AtCKX2)的表达载体,通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)转化的方法获得转基因植株.利用启动子Tfm7和目的基因AtCKX2的特异性引物,对转基因植株进行验证,PCR结果表明启动子Tfm7和目的基因AtCKX2已经转进番茄植株内.qRT-PCR结果显示:AtCKX2基因在番茄植株的叶片内不表达,在授粉后的花中表达.AtCKX2基因在授粉花后5 d的果实中表达量最高,随着果实的发育,AtCKX2基因的表达量逐渐下降,在果实发育后期表达量最低.对番茄果实进行研究发现,转基因番茄果实中内源细胞分裂素玉米素(zeatin,ZT)、异戊烯基腺嘌呤(isopentenyladenine,iP)的含量降低,单果重量和纵横径减小,而且果实中的可溶性糖和可溶性蛋白的含量降低,可滴定酸的含量上升.这些结果表明内源细胞分裂素能够影响番茄果实的生长发育,本研究为细胞分裂素在果实发育中的作用提供了新思路和依据.
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