目的采用高效液相色谱-高分辨质谱联用法,分析硫酸依替米星的有关物质结构及来源。方法采用宽范围的Gemini NX C₁₈（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,以[水-氨水-冰乙酸（96∶3.6∶0.4）]-甲醇（70∶30）为流动相,采用柱后分流模式,QExactive高分辨质谱检测。分析依替米星及有关物质的一级和二级质谱数据,归纳同类化合物的质谱裂解规律,根据该规律及未知化合物的一级、二级高分辨质谱数据推测各有关物质的结构并分析其来源。结果采用该方法,两家企业生产的硫酸依替米星中共检出有关物质65个,其中A企业含有38个,B企业含有59个,32个为共有杂质。对54个有关物质进行了结构推测,另11个有关物质目前未推测出结构。两企业之间有关物质存在显著差异,分析了可能的合成工艺关键参数。结论采用HPLC-HRMS/MS对硫酸依替米星有关物质进行分析,准确性更好,通过对有关物质溯源及结构分析,为该品种的工艺优化研究提供了理论依据。