【摘 要】
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本试验对猪脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)2A蛋白进行原核表达和纯化。采用大肠杆菌原核表达系统,将EMCV 2A基因插入原核表达载体pET-28a-sumo中构建重组原
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,西北农林科技大学动物医学院,保定职业技术学院畜牧兽医系,河北农业大学动物医学院
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目“猪脑心肌炎病毒2A蛋白调控宿主细胞凋亡分子机制研究”(31873019),河北省重点研发计划项目(19226622D)
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本试验对猪脑心肌炎病毒(encephalomyocarditis virus,EMCV)2A蛋白进行原核表达和纯化。采用大肠杆菌原核表达系统,将EMCV 2A基因插入原核表达载体pET-28a-sumo中构建重组原核表达质粒pET28a-EMCV-2A,经PCR和测序鉴定无误。将重组原核表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,超声破碎后,2A蛋白的表达主要以包涵体形式存在。通过优化蛋白表达条件,使目的蛋白能够实现可溶性表达。利用磁珠纯化方法对重组蛋白进行纯化,并以SDS-PAGE和Weste
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