【摘 要】
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目的 建立乙型肝炎病毒(HHV)阳性血清体外感染人肝癌细胞系HepG -2的方法.方法 低温同步化处理HepG -2细胞后用高浓度HBV阳性血清与含有4％聚乙二醇的无血清伊格尔极限必需培
【机 构】
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复旦大学公共卫生学院流行病学教研室公共卫生安全教育部重点实验室,上海,200032
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目的 建立乙型肝炎病毒(HHV)阳性血清体外感染人肝癌细胞系HepG -2的方法.方法 低温同步化处理HepG -2细胞后用高浓度HBV阳性血清与含有4％聚乙二醇的无血清伊格尔极限必需培养基(MEM)共孵育HepG -2细胞,设阴性对照组和空白对照组；18 h后加入含10％胎牛血清的MEM继续培养6d,每隔24h收集细胞和培养上清,荧光定量PCR检测HBV DNA,间接免疫荧光技术检测细胞内乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg).结果 HBV阳性血清感染组HepG -2细胞内和培养上清中在感染后第1d可检测到HBV DNA,分别为(16.04 ±7.99)×103、(8.84±3.97)×103 copies/mL,细胞内DNA含量在第2d达到(3.51±1.86) ×105 copies/mL,然后逐渐下降,在第4d降到检测下限以下,而培养上清中病毒DNA在检测的时间内逐渐升高,在第6天达到(8.41±5.34)×105 copies/mL；间接免疫荧光检测感染组细胞膜和胞浆中均有HBsAg表达；传代培养感染细胞后,在第1代细胞培养上清和细胞内均可检测到HBV DNA(3.58×105、7.34×105 copies/mL),第2代培养上清中可检测到少量HBV DNA(2.89×103 copies/mL),但细胞内检测到HBV DNA低于检测下限(896 copies/mL),第3代细胞的上清和细胞内均未检测到HBV DNA.结论 HBV阳性血清在一定条件下可以感染HepG -2细胞,病毒能在细胞内进行短期复制.
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