论文部分内容阅读
[摘 要]目前，柑橘溃疡病作为柑橘生产中的主要病害，成为国内外植物检疫的重要对象。该病害主要侵染芸香料的枳属、柑橘属和金柑属等，在我国广西、福建、四川等地出现的溃疡病菌多为亚洲型菌系，也就是A菌系。本文主要进行广西柑橘溃疡病原分析与流行研究，以期为柑橘溃疡病的防治工作提供建议和参考。
[关键词]柑橘溃疡病；病原分析；流行研究；防治
中图分类号：S436.66 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）06-0364-01
0 引言
柑橘不仅是我国亚热带地区栽培面积最广的果树种类，也是世界上最重要的商品水果。柑橘的种类较多，主要分布在我国广东、广西、四川、福建、江西等地区，不仅具有较高的营养价值，也可以作为医药和食品工业上的原材料。目前，柑橘溃疡病已经成为柑橘生产严重的病害之一。该病害的病菌来源多样，并受到温度和湿度的影响。关于柑橘溃疡病的流行学，主要就是根据该病菌的发生机制来预测病害的发展趋势和损失，以及病害的管理和防治等问题。
1 柑橘溃疡病概述
1.1 柑橘溃疡病的危害性
柑橘溃疡病的发生最早可以追溯到1840年，1912年在美国佛罗里达州发现。柑橘溃疡病主要是被黄单胞杆菌的致病病种引发的，该菌体的长度约为1.5—2.0μm，属于革兰氏阴性菌。柑橘溃疡病具有显著的症状，首先是叶片正面隆起并出现黄色病斑，然后病变表面开始破裂，中心凹陷。果实上会想成与叶片相似的病斑，直径约为5mm。柑橘溃疡病可以导致其果实营养价值减少，特别是在春夏雨季时，病害会加重。
1.2 柑橘溃疡病菌系的多样性
因为实验方案上还存在局限性，所以还能明确划定柑橘溃疡病的病原菌类别。但是，目前已经存在A型、B型、C型、D型、E型等多种类型的柑橘溃疡病菌系。其中，A型也即亚洲型菌株，不仅常见而且危害严重，存在于世界各地。A型菌株适合在培养基中生存，并且可以在CP1和CP2中溶解。最近的研究表明，A、B、C、D、E等各菌株之间相关性不超过50%。
1.3 柑橘溃疡病的发生和外界环境之间的关系
柑橘溃疡病病原菌可以在潮湿环境下发生扩散，比如在暴风雨的条件下，柑橘溃疡病会传播更远的距离。此外，剪枝也会促进该病菌的感染。当温度为20度到30度之间是，柑橘溃疡病的病斑会在一周后形成。同时，风夹雨一般是柑橘溃疡病在中短距离上的主要传播形式，而长距离的传播主要是因为人为运输柑橘所致。
1.4 柑橘溃疡病的流行模式
由于柑橘溃疡病主要依赖于飞溅来传播，所以会造成较多刺激感染点，并且形成无规则、大面积的病区，进而使得病情梯度不能简单描述和量化。发病严重的柑橘果树一般会聚集，同一行内感染溃疡病的几率更大，这表明果树距离越近就越容易互相感染。在病情发展上，顺风风向要比逆风风向更严重。同时，柑橘溃疡病的发生率和病害程度和柑橘品种、树体以及施肥有关，而且和寄主敏感性之间存在正相关的关系。
2 柑橘溃疡病病原菌分化研究
2.1 柑橘溃疡病的分离及鉴定
2.1.1材料与方法
样本材料为广西农垦源头农场的纽荷尔脐橙、冰糖橙、甜橙、红心脐橙、七九0四脐橙等品种。实验试剂主要有革兰氏染色液、番红复染剂、细胞壁染色液、氧化酶检测试剂以及相应的培养基。使用平板划线分离法对溃疡病斑菌株进行分离，并对菌株的致病性和属性进行鉴定。采用针刺法来实行温室鉴定，把个菌株悬液放置在培养皿中，接种前应保湿12个小时，接种后则保湿一天。对于菌株属性，选择在30度的环境下培养两天，并观察菌落的生长状况。
2.1.2 结果
在分离菌株的制定性上，纽荷尔脐橙、冰糖橙、甜橙、红心脐橙、七九0四脐橙等品种经过温室接种鉴定后，均表明有典型溃疡病产生。在菌株属性上，以上病原菌可以分为四类属性，分别为假单胞杆菌属、欧文氏杆菌属、棒状杆菌属、黄单胞杆菌属。
2.2 杆菌溃疡病菌系生理生化分化的研究
2.2.1 材料与方法
将以上样本品种编号为STY、TCS-1、HCS、HXCS、TCS-1、QC-1、HCS-1、HJC、JC-1、BTC等。试验试剂包括细菌生化微量鉴定管、氧化酶试剂、过氧化氢酶试剂、甲基红试剂、卢戈氏碘液、二苯胺试剂，以及相应的病菌培养基。在试验方法上，对于培养一天后的各菌种，先用1%盐酸湿润氨基二甲基苯的滤纸，一旦10sec内菌落出现红色就表明是阳性，反之为阴性。对于溃疡病原菌株的生化特征，可以在室温下培养，并观察菌落周边是否出现不透明的情况，如果存在暖磷脂酶，就会出现不透明区域，也即阳性。使用细菌生化微量鉴定管来检测明胶的水解，如果其在4度时为液态，就是阳性，而阴性则为4度时呈现固态。
2.2.2 结果
在对以上溃疡病菌株进行30项生理特征分析后，发现以下现象：菌株HCS-1和TCS-1无法利用醋酸盐，其它菌株则可以；菌株HXCS、NRC可以利用果糖，其它菌株则不可以；在利用淀粉的情况上，唯有QC-1不能利用。同时，在溃疡病原菌的生化特征分析上，以上菌株在经过不同试剂的测定，发现其在过氧化氢酶、硝酸盐还原、明胶水解、卵磷脂酶下呈阳性，其它情况下位阴性。此外，菌株NRC、HCS可以利用蛋白胨来分解色氨酸，TCS-1和HJC两种菌株可以利用石蕊牛奶，其它菌株则不可以。
3 柑橘溃疡病流行测报及其化学防治
3.1 柑橘溃疡病流行的预测预报
3.1.1材料与方法
选取3年生的纽荷尔脐橙作为样本品种，实验基地选择为广西农垦源头农场。首先是对该区域纽荷尔脐橙品种的病情指数进行调查及计算。该试验田没有应用任何防病害措施，随机选取150株，每15田调查一次，记录叶片每级个数和总个数。病情指数的计算公式为：
同时，采用自回归模型来分析以上数据，并且应用AR模型来进行观测数据的噪声检验。为了提高模型准确率，需要使用该模型至少对4次调查数据实行检验，依据计算模型的相对误差和绝对误差，对模型的准确度进行评估。
3.1.2 结果
该试验地属于亚热带海洋性季风气候，每年日照总时数接近2000h，年平均气温为19.9摄氏度，年平均降水量为1636mm，相对湿度为70%—85%。结合柑橘溃疡病AR模型的建立，获得了比较精准的中长期的预报模型，并且给广西农垦源头农场大面积柑橘的溃疡病防治与管理提供了参考。
3.2 柑橘溃疡病的防治及病原菌抗药性研究
在对室内20种药剂进行平板帅选后，我们得到5种抑菌能力强的药剂，分别为福美双、溃枯宁、杀毒巩、龙克菌和可杀得。在柑橘溃疡病的田间防治过程中，以上5种菌种中，防治效果最好的为溃枯宁和可杀得。同时，在通过对药剂处理的不同区域中，进行了分离溃疡菌的抗药性试验。并且发现不同处理区域内的菌株都存在显著的抗药性。此外，在对菌株进行继代培养后，菌株的抗药性也会变得较为复杂。比如在硫酸铜的抗性上，虽然第一代菌株的抗药性要比前面4次稳定，但是继代培养后就会变得复杂化。这也表明了，实验室内实行的抗药性试验会和实际情况存在一定的差异。
4 结束语
综上所述，本文初步探索了广西柑橘溃疡病原分析与流行情况，在对病菌实行分化后发现，今后应当加强分子技术的应用。针对广西柑橘溃疡病的发生的严重危害性，本文建议应当在精确预报的基础上实施合理的防治措施。首先就是严格的检疫制度，其次便是及时清除病原菌，比如烧毁枯枝和病枝等，最后就是科学合理的施肥，提高植株的抗病能力。总而言之，有关柑橘溃疡病原分析与流行方面的研究还需要进一步去实验和探索。
参考文献
[1] 王中康.柑桔溃疡病菌PCR快速检验检疫技术研究[J].植物病理学报，2011，34（11）.
[2] 朱文适.柑橘溃疡病潜伏期诊断与取样部位的关系[J].山地农业生物学报，2011，18（1）.
[3] 付志华.柑橘溃疡病田间消长规律及药剂防治技术[J].植保技术与推广，2011，20（6）.
[关键词]柑橘溃疡病；病原分析；流行研究；防治
中图分类号：S436.66 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2015）06-0364-01
0 引言
柑橘不仅是我国亚热带地区栽培面积最广的果树种类，也是世界上最重要的商品水果。柑橘的种类较多，主要分布在我国广东、广西、四川、福建、江西等地区，不仅具有较高的营养价值，也可以作为医药和食品工业上的原材料。目前，柑橘溃疡病已经成为柑橘生产严重的病害之一。该病害的病菌来源多样，并受到温度和湿度的影响。关于柑橘溃疡病的流行学，主要就是根据该病菌的发生机制来预测病害的发展趋势和损失，以及病害的管理和防治等问题。
1 柑橘溃疡病概述
1.1 柑橘溃疡病的危害性
柑橘溃疡病的发生最早可以追溯到1840年，1912年在美国佛罗里达州发现。柑橘溃疡病主要是被黄单胞杆菌的致病病种引发的，该菌体的长度约为1.5—2.0μm，属于革兰氏阴性菌。柑橘溃疡病具有显著的症状，首先是叶片正面隆起并出现黄色病斑，然后病变表面开始破裂，中心凹陷。果实上会想成与叶片相似的病斑，直径约为5mm。柑橘溃疡病可以导致其果实营养价值减少，特别是在春夏雨季时，病害会加重。
1.2 柑橘溃疡病菌系的多样性
因为实验方案上还存在局限性，所以还能明确划定柑橘溃疡病的病原菌类别。但是，目前已经存在A型、B型、C型、D型、E型等多种类型的柑橘溃疡病菌系。其中，A型也即亚洲型菌株，不仅常见而且危害严重，存在于世界各地。A型菌株适合在培养基中生存，并且可以在CP1和CP2中溶解。最近的研究表明，A、B、C、D、E等各菌株之间相关性不超过50%。
1.3 柑橘溃疡病的发生和外界环境之间的关系
柑橘溃疡病病原菌可以在潮湿环境下发生扩散，比如在暴风雨的条件下，柑橘溃疡病会传播更远的距离。此外，剪枝也会促进该病菌的感染。当温度为20度到30度之间是，柑橘溃疡病的病斑会在一周后形成。同时，风夹雨一般是柑橘溃疡病在中短距离上的主要传播形式，而长距离的传播主要是因为人为运输柑橘所致。
1.4 柑橘溃疡病的流行模式
由于柑橘溃疡病主要依赖于飞溅来传播，所以会造成较多刺激感染点，并且形成无规则、大面积的病区，进而使得病情梯度不能简单描述和量化。发病严重的柑橘果树一般会聚集，同一行内感染溃疡病的几率更大，这表明果树距离越近就越容易互相感染。在病情发展上，顺风风向要比逆风风向更严重。同时，柑橘溃疡病的发生率和病害程度和柑橘品种、树体以及施肥有关，而且和寄主敏感性之间存在正相关的关系。
2 柑橘溃疡病病原菌分化研究
2.1 柑橘溃疡病的分离及鉴定
2.1.1材料与方法
样本材料为广西农垦源头农场的纽荷尔脐橙、冰糖橙、甜橙、红心脐橙、七九0四脐橙等品种。实验试剂主要有革兰氏染色液、番红复染剂、细胞壁染色液、氧化酶检测试剂以及相应的培养基。使用平板划线分离法对溃疡病斑菌株进行分离，并对菌株的致病性和属性进行鉴定。采用针刺法来实行温室鉴定，把个菌株悬液放置在培养皿中，接种前应保湿12个小时，接种后则保湿一天。对于菌株属性，选择在30度的环境下培养两天，并观察菌落的生长状况。
2.1.2 结果
在分离菌株的制定性上，纽荷尔脐橙、冰糖橙、甜橙、红心脐橙、七九0四脐橙等品种经过温室接种鉴定后，均表明有典型溃疡病产生。在菌株属性上，以上病原菌可以分为四类属性，分别为假单胞杆菌属、欧文氏杆菌属、棒状杆菌属、黄单胞杆菌属。
2.2 杆菌溃疡病菌系生理生化分化的研究
2.2.1 材料与方法
将以上样本品种编号为STY、TCS-1、HCS、HXCS、TCS-1、QC-1、HCS-1、HJC、JC-1、BTC等。试验试剂包括细菌生化微量鉴定管、氧化酶试剂、过氧化氢酶试剂、甲基红试剂、卢戈氏碘液、二苯胺试剂，以及相应的病菌培养基。在试验方法上，对于培养一天后的各菌种，先用1%盐酸湿润氨基二甲基苯的滤纸，一旦10sec内菌落出现红色就表明是阳性，反之为阴性。对于溃疡病原菌株的生化特征，可以在室温下培养，并观察菌落周边是否出现不透明的情况，如果存在暖磷脂酶，就会出现不透明区域，也即阳性。使用细菌生化微量鉴定管来检测明胶的水解，如果其在4度时为液态，就是阳性，而阴性则为4度时呈现固态。
2.2.2 结果
在对以上溃疡病菌株进行30项生理特征分析后，发现以下现象：菌株HCS-1和TCS-1无法利用醋酸盐，其它菌株则可以；菌株HXCS、NRC可以利用果糖，其它菌株则不可以；在利用淀粉的情况上，唯有QC-1不能利用。同时，在溃疡病原菌的生化特征分析上，以上菌株在经过不同试剂的测定，发现其在过氧化氢酶、硝酸盐还原、明胶水解、卵磷脂酶下呈阳性，其它情况下位阴性。此外，菌株NRC、HCS可以利用蛋白胨来分解色氨酸，TCS-1和HJC两种菌株可以利用石蕊牛奶，其它菌株则不可以。
3 柑橘溃疡病流行测报及其化学防治
3.1 柑橘溃疡病流行的预测预报
3.1.1材料与方法
选取3年生的纽荷尔脐橙作为样本品种，实验基地选择为广西农垦源头农场。首先是对该区域纽荷尔脐橙品种的病情指数进行调查及计算。该试验田没有应用任何防病害措施，随机选取150株，每15田调查一次，记录叶片每级个数和总个数。病情指数的计算公式为：
同时，采用自回归模型来分析以上数据，并且应用AR模型来进行观测数据的噪声检验。为了提高模型准确率，需要使用该模型至少对4次调查数据实行检验，依据计算模型的相对误差和绝对误差，对模型的准确度进行评估。
3.1.2 结果
该试验地属于亚热带海洋性季风气候，每年日照总时数接近2000h，年平均气温为19.9摄氏度，年平均降水量为1636mm，相对湿度为70%—85%。结合柑橘溃疡病AR模型的建立，获得了比较精准的中长期的预报模型，并且给广西农垦源头农场大面积柑橘的溃疡病防治与管理提供了参考。
3.2 柑橘溃疡病的防治及病原菌抗药性研究
在对室内20种药剂进行平板帅选后，我们得到5种抑菌能力强的药剂，分别为福美双、溃枯宁、杀毒巩、龙克菌和可杀得。在柑橘溃疡病的田间防治过程中，以上5种菌种中，防治效果最好的为溃枯宁和可杀得。同时，在通过对药剂处理的不同区域中，进行了分离溃疡菌的抗药性试验。并且发现不同处理区域内的菌株都存在显著的抗药性。此外，在对菌株进行继代培养后，菌株的抗药性也会变得较为复杂。比如在硫酸铜的抗性上，虽然第一代菌株的抗药性要比前面4次稳定，但是继代培养后就会变得复杂化。这也表明了，实验室内实行的抗药性试验会和实际情况存在一定的差异。
4 结束语
综上所述，本文初步探索了广西柑橘溃疡病原分析与流行情况，在对病菌实行分化后发现，今后应当加强分子技术的应用。针对广西柑橘溃疡病的发生的严重危害性，本文建议应当在精确预报的基础上实施合理的防治措施。首先就是严格的检疫制度，其次便是及时清除病原菌，比如烧毁枯枝和病枝等，最后就是科学合理的施肥，提高植株的抗病能力。总而言之，有关柑橘溃疡病原分析与流行方面的研究还需要进一步去实验和探索。
参考文献
[1] 王中康.柑桔溃疡病菌PCR快速检验检疫技术研究[J].植物病理学报，2011，34（11）.
[2] 朱文适.柑橘溃疡病潜伏期诊断与取样部位的关系[J].山地农业生物学报，2011，18（1）.
[3] 付志华.柑橘溃疡病田间消长规律及药剂防治技术[J].植保技术与推广，2011，20（6）.