探讨血小板衍生生长因子（PDGF）-BB是否通过去乙酰化酶沉默信息调节因子3（SIRT3）影响糖酵解途径进而调控肺动脉平滑肌细胞（PASMC）的表型转化。
方法采用组织贴块法培养大鼠原代PASMC。分组实验中以PDGF-BB作为刺激因子，以2-脱氧葡萄糖（2-DG）作为糖酵解途径抑制剂，将PASMC分为空白对照组、PDGF-BB（30 ng/ml）组、PDGF-BB（30 ng/ml）+2-DG（10 mmol/L）组；在慢病毒过表达实验中，将PASMC分为空白对照组、PDGF-BB（30 ng/ml）组，PDGF-BB（30 ng/ml）+SIRT3过表达组，PDGF-BB（30 ng/ml）+空载体组。分别采用实时定量PCR（RT-qPCR）及Western blot法检测PASMC中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、平滑肌肌球蛋白重链（SM-MHC）、钙调蛋白（calponin）、波形蛋白（vimentin）等表型指标的表达。同时采用细胞免疫荧光染色检测α-SMA表达水平。采用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EDU）检测PASMC增殖情况。采用Western blot法检测PDGF-BB刺激后SIRT3的蛋白表达。在慢病毒过表达实验中，分别采用RT-qPCR、Western blot法检测葡萄糖转运蛋白1（Glut1）及有氧糖酵解酶mRNA和蛋白的表达水平。
结果（1）PDGF-BB通过糖酵解途径影响PASMC表型转化：PDGF-BB组细胞收缩表型指标SM-MHC、calponin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平均低于空白对照组（P均<0.05），合成表型指标vimentin的mRNA和蛋白表达水平则均高于空白对照组（P均<0.05）。PDGF-BB+2-DG组细胞收缩表型指标SM-MHC、calponin、α-SMA的mRNA和蛋白表达水平均高于PDGF-BB组（P均<0.05），合成表型指标vimentin的mRNA和蛋白表达水平则均低于PDGF-BB组（P均<0.05）。免疫荧光结果显示，PDGF-BB组α-SMA阳性细胞数少于空白对照组，而PDGF-BB+2-DG组则多于PDGF-BB组。（2）PDGF-BB通过糖酵解促进细胞增殖：PDGF-BB组细胞增殖数多于空白对照组，而PDGF-BB+2-DG组则少于PDGF-BB组。（3）PDGF-BB抑制PASMC的SIRT3蛋白表达：PDGF-BB组细胞SIRT3蛋白表达水平低于空白对照组（P<0.05）。（4）PDGF-BB通过SIRT3影响糖酵解：RT-qPCR结果显示，PDGF-BB组细胞Glut1及糖酵解关键酶HK2、PFKFB3的mRNA表达水平均高于空白对照组（P均<0.05），PDGF-BB+SIRT3过表达组则均低于PDGF-BB组（P均<0.05），PDGF-BB+空载体组与PDGF-BB组比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。Western blot结果显示，PDGF-BB组细胞Glut1及HK2、PFKFB3的蛋白表达水平均高于空白对照组（P均<0.05），PDGF-BB+SIRT3过表达组则均低于PDGF-BB组（P均<0.05），PDGF-BB+空载体组与PDGF-BB组比较差异均无统计学意义（P均>0.05）。
结论PDGF-BB通过SIRT3促进有氧糖酵解，进而调控PASMC表型转化。