【摘 要】
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目的通过对黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72进行基因克隆、表达,获得目的蛋白并分析该蛋白在不同条件下的理化性质。方法聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因afp72,克隆到pUCm-T载体中测序并
【机 构】
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郑州人民医院检验科,新乡医学院基础医学院,河南师范大学生命科学学院
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目的通过对黄粉甲抗冻蛋白TmAFP72进行基因克隆、表达,获得目的蛋白并分析该蛋白在不同条件下的理化性质。方法聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因afp72,克隆到pUCm-T载体中测序并保存。双酶切法将afp72基因定向重组到毕赤酵母表达载体pPIC9K中。将重组质粒转化人毕赤酵母GS115,筛选出重组菌株。用甲醇诱导目的蛋白表达,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染鉴定。用细菌抗冻法检测抗冻蛋白在不同酸碱条件下的活性,及经100℃不同热处理时间下的抗冻活性。结果 PCR扩增获得目的基因片段afp72,克隆质粒p
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