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【摘要】目的:对比分析中药材中农药残留采取不同提取方法的有效性。方法:采取索氏提取、加速溶剂萃取以及超声提取等方式提取中药材中农药残留,经过凝胶渗透色谱、浓硫酸磺化以及弗罗里硅土柱净化方式,得出相应的样品,然后对比农药残留含量。结果:凝胶渗透色谱相较于固相萃取、磺化法准确率较高。结论:ASE的提取率相对较高,检测的结果也较为准确,并且操作自动,可以省时省力。
【关键词】中药材;农药残留;超声提取法
[中图分类号]R473 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2018)02-210-02
中药多采用口服的方式,通过改善人体的内环境提高人体抵抗疾病的能力,顺其自然的治好疾病。相对于西药来说,中药的毒副作用更小一些,但中药材在种植过程中,农药使用导致一定的残留,对使用者造成一定危害。有研究[1]认为,中药材农药残留检测方法比较多,很多检测方式都是采取添加回收率的方式,对农药提取是否安全进行衡量。然而,添加农药与药材自身吸收农药的状态存在巨大差异,但添加的农药和药材本身吸收的农药状态差异很大,通过添加回收方式无法对药物自身对农药吸收的情况进行准确反映。本次研究采用索氏提取、加速溶剂萃取以及超声提取等方式提取中药材中农药残留,探究了中药材中农药残留采取不同提取方法的有效性,总结如下:
1.仪器、试药与方法
1.1 仪器、试药
仪器包含SHB-B型循环水式多用真空泵、GC-2气相色谱仪——电子捕获检测器(GC-ECD)、HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)、DB1701石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm):DionexASE-350加速溶剂萃取仪、KH-3000plus凝胶渗透色谱仪、净化柱、填料50gBio-BeadsTypeS-X3200-400;KX(GJ)100-1密封制样粉碎机、CP214电子天平、SK5200LHC超声波清洗器、RE-52AA旋转蒸发仪等。
玄参、白术、黄芪;Florisil硅土柱、正己烷、无水硫酸钠、浓硫酸、乙酸乙酷、丙酮、石油醚、乙睛。农药的标准品:六六六(BHC)3个异构体α-BHC、β-BHC、γ-BHC、六氯苯、五氯硝基苯、pp’-DDE、反式氯菊酯(trans-permethrin,批号80104,纯度都高于99.0%。
1.2 方法
1.2.1 提取方法
将样品在自然条件下阴干后粉碎,过0.24mm孔径的样品筛,待用。
加速溶剂萃取:准确称取样品1g、硅藻土1g(硅藻土起到分散剂的作用),混匀,置于10mL的萃取池中,待测。ASE系统壓力1500psi,温度100℃,加热时间5min,静态萃取时间5min,冲洗体积为60%,氮吹60s,循环2次。提取液在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干,待净化。
超声提取:准确称取1g样品与1g无水硫酸钠,混匀,置于100mL具塞三角瓶中,加入提取溶剂30mL,冰浴提取15min,将提取液过滤至100mL茄形瓶中,重复提取1次,合并提取液并在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干,待净化。
索氏提取:准确称取样品10g与无水硫酸钠1.0g,混匀,置于滤纸包中,放入索氏提取器中,加80mL提取溶剂(索氏提取器中30mL,100mL圆底烧瓶中50mL),65℃水浴提取30min,约回流6次,将提取液转移至100mL茄形瓶中,在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干,待净化。
1.2.2 净化方法
磺化法指的是把浓缩后的残渣用正己烷定量转移至具塞刻度试管中,定容至5mL,再用移液枪加入1mL浓硫酸,涡旋1min,3000r/min离心10min,取上清液,进气相色谱仪测定。
固相萃取法操作如下:将浓缩后的残渣加1mL的正己烷进行溶解,将装有1mL左右高度无水硫酸钠的弗罗里硅土柱置于固定架上,先用10mL正己烷-乙酸乙醋(85:15)进行淋洗,当淋洗液近干时快速移入样品浓缩液,用2mL淋洗液脱茄,转入柱中,用50mL茄形瓶收集洗脱液20mL,在40℃水浴旋转浓缩至近干。
凝胶渗透色谱是把浓缩后残渣用乙酸乙醋-环己烷(1:1,V/V)定容至5mL,0.22μm滤膜过滤后,进行凝胶渗透色谱净化,乙酸乙醋-环己烷(1:1,V/V)为流动相,流速5mL/min,玄参样品收集11-14min流出物,白术收集11-16min流出物,黄芪样品收集14-17min流出物,在40℃水浴中进行浓缩,加正己烷1mL溶解,待测。
1.2.3 色谱条件
HP-5弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm,0.25μm),进样口温度250℃,不分流进样。升温程序:初始温度120℃保持1min,以8℃/min速度升温至150℃保持2min,以4℃/min速度升温至270℃保持4min。检测器温度为300℃,流速为1mL/min,进样量为1μL。
2.结果
检测结果见表1。
3.讨论
现阶段,在对中药材中农药残留进行监测时,主要采取回收率判断检测结果好坏。然而,基于添加农药会附着在药材的表面,和药材自然生长时所吸取农药不一样,两者提取出农药量也就存在差异[2]。本次研究中指出ASE的提取率相对较高,检测的结果也较为准确,并且操作自动,可以省时省力。但是在实际检测过程中,需要按照自身情况来设计方案与方法。
参考文献:
[1]刘洪波.气质联用测定杭白术等3种中药中5种拟除虫菊醋类农药残留[J].浙江农林大学学报,2015,32(1):110-115.
[2]何惠芳.气相色谱技术检测中药农药残留的应用体会[J].医药前沿,2014,23(18):10-11.
【关键词】中药材;农药残留;超声提取法
[中图分类号]R473 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249(2018)02-210-02
中药多采用口服的方式,通过改善人体的内环境提高人体抵抗疾病的能力,顺其自然的治好疾病。相对于西药来说,中药的毒副作用更小一些,但中药材在种植过程中,农药使用导致一定的残留,对使用者造成一定危害。有研究[1]认为,中药材农药残留检测方法比较多,很多检测方式都是采取添加回收率的方式,对农药提取是否安全进行衡量。然而,添加农药与药材自身吸收农药的状态存在巨大差异,但添加的农药和药材本身吸收的农药状态差异很大,通过添加回收方式无法对药物自身对农药吸收的情况进行准确反映。本次研究采用索氏提取、加速溶剂萃取以及超声提取等方式提取中药材中农药残留,探究了中药材中农药残留采取不同提取方法的有效性,总结如下:
1.仪器、试药与方法
1.1 仪器、试药
仪器包含SHB-B型循环水式多用真空泵、GC-2气相色谱仪——电子捕获检测器(GC-ECD)、HP-5石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm)、DB1701石英毛细管柱(30m×0.32mm×0.25μm):DionexASE-350加速溶剂萃取仪、KH-3000plus凝胶渗透色谱仪、净化柱、填料50gBio-BeadsTypeS-X3200-400;KX(GJ)100-1密封制样粉碎机、CP214电子天平、SK5200LHC超声波清洗器、RE-52AA旋转蒸发仪等。
玄参、白术、黄芪;Florisil硅土柱、正己烷、无水硫酸钠、浓硫酸、乙酸乙酷、丙酮、石油醚、乙睛。农药的标准品:六六六(BHC)3个异构体α-BHC、β-BHC、γ-BHC、六氯苯、五氯硝基苯、pp’-DDE、反式氯菊酯(trans-permethrin,批号80104,纯度都高于99.0%。
1.2 方法
1.2.1 提取方法
将样品在自然条件下阴干后粉碎,过0.24mm孔径的样品筛,待用。
加速溶剂萃取:准确称取样品1g、硅藻土1g(硅藻土起到分散剂的作用),混匀,置于10mL的萃取池中,待测。ASE系统壓力1500psi,温度100℃,加热时间5min,静态萃取时间5min,冲洗体积为60%,氮吹60s,循环2次。提取液在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干,待净化。
超声提取:准确称取1g样品与1g无水硫酸钠,混匀,置于100mL具塞三角瓶中,加入提取溶剂30mL,冰浴提取15min,将提取液过滤至100mL茄形瓶中,重复提取1次,合并提取液并在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干,待净化。
索氏提取:准确称取样品10g与无水硫酸钠1.0g,混匀,置于滤纸包中,放入索氏提取器中,加80mL提取溶剂(索氏提取器中30mL,100mL圆底烧瓶中50mL),65℃水浴提取30min,约回流6次,将提取液转移至100mL茄形瓶中,在旋转蒸发仪40℃水浴中浓缩至近干,待净化。
1.2.2 净化方法
磺化法指的是把浓缩后的残渣用正己烷定量转移至具塞刻度试管中,定容至5mL,再用移液枪加入1mL浓硫酸,涡旋1min,3000r/min离心10min,取上清液,进气相色谱仪测定。
固相萃取法操作如下:将浓缩后的残渣加1mL的正己烷进行溶解,将装有1mL左右高度无水硫酸钠的弗罗里硅土柱置于固定架上,先用10mL正己烷-乙酸乙醋(85:15)进行淋洗,当淋洗液近干时快速移入样品浓缩液,用2mL淋洗液脱茄,转入柱中,用50mL茄形瓶收集洗脱液20mL,在40℃水浴旋转浓缩至近干。
凝胶渗透色谱是把浓缩后残渣用乙酸乙醋-环己烷(1:1,V/V)定容至5mL,0.22μm滤膜过滤后,进行凝胶渗透色谱净化,乙酸乙醋-环己烷(1:1,V/V)为流动相,流速5mL/min,玄参样品收集11-14min流出物,白术收集11-16min流出物,黄芪样品收集14-17min流出物,在40℃水浴中进行浓缩,加正己烷1mL溶解,待测。
1.2.3 色谱条件
HP-5弹性石英毛细管柱(30m×0.32mm,0.25μm),进样口温度250℃,不分流进样。升温程序:初始温度120℃保持1min,以8℃/min速度升温至150℃保持2min,以4℃/min速度升温至270℃保持4min。检测器温度为300℃,流速为1mL/min,进样量为1μL。
2.结果
检测结果见表1。
3.讨论
现阶段,在对中药材中农药残留进行监测时,主要采取回收率判断检测结果好坏。然而,基于添加农药会附着在药材的表面,和药材自然生长时所吸取农药不一样,两者提取出农药量也就存在差异[2]。本次研究中指出ASE的提取率相对较高,检测的结果也较为准确,并且操作自动,可以省时省力。但是在实际检测过程中,需要按照自身情况来设计方案与方法。
参考文献:
[1]刘洪波.气质联用测定杭白术等3种中药中5种拟除虫菊醋类农药残留[J].浙江农林大学学报,2015,32(1):110-115.
[2]何惠芳.气相色谱技术检测中药农药残留的应用体会[J].医药前沿,2014,23(18):10-11.