【摘 要】
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用活性筛选法从产气单胞菌点状亚种ST-78-3-3(Aeromonas puctata subsp.puctata ST-78-3-3)的基因组中克隆了脯氨酰内肽酶(Prolyl Endopeptidase,简称apPEP)的基因,测定了含
【机 构】
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中国科学院上海生物工程研究中心,中国科学院上海生物化学研究所
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用活性筛选法从产气单胞菌点状亚种ST-78-3-3(Aeromonas puctata subsp.puctata ST-78-3-3)的基因组中克隆了脯氨酰内肽酶(Prolyl Endopeptidase,简称apPEP)的基因,测定了含有PEP基因的3.3kb DNA 片段的序列,第20-2092bp编码了690个氨基酸组成的脯氨酰内肽酶,经检索是一种新的PEP基因.并构建了一株组成性高效表达PEP的基因工程菌BL21/pGEM-PEP.BL21/pGEM-PEP在YH培养基中apPEP的表达量占菌体总蛋白的30%左右,活力是野生菌的112倍,表达产物主要为可溶性的胞内蛋白,约5%分泌到胞外.非还原SDS-PAGE显示为单体,分子量为76kD,与基因序列预测的分子量一致.试管培养后纯化得到了纯度大于90%的重组脯氨酰内肽酶,比活力为67U/mg.
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