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摘 要:桃拉病毒(TSV)病是危害我们对虾养殖业健康发展的主要疾病之一,目前仍无切实有效的防控措施。对虾血细胞既是细胞免疫的承担者,又是体液免疫因子的提供者,研究血细胞在TSV入侵过程中的反应和变化,对提出有效防止TSV方法上有着积极意义。用TSV粗提液投喂感染南美白对虾,通过RT-PCR法,显微镜观察法研究了感染后南美白对虾发病死亡率,及总血淋巴细胞数和不同种类血细胞的比率组成变化,并检测了感染前后血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和酚氧化酶(PO)活力的变化。结果显示,TSV感染虾发生了60%~80%的死亡率,出现典型的TSV症状,PCR证实TSV条带为阳性;而对照组仅有少量的虾只发生死亡。在TSV感染2~3d后,对虾总淋巴细胞数,透明细胞数,半颗粒细胞数及颗粒细胞数分别下降了约69%、76%、60%和70%;而SOD和PO活力分别下降了约25%和68%。这一结果显示TSV可能通过降低对虾血液学免疫力而实现其高致病性,通过提高对虾血液学指标可有效降低TSV感染的致病力。
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1.7 酚氧化酶(PO)活力测定
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对虾血液免疫系统包括3类血细胞,即透明细胞,半颗粒细胞和颗粒细胞,以及存在于血浆中的免疫分子。3种血细胞在免疫防御过程中各自担当不同的功能,透明细胞细胞质内缺少颗粒,其主要作用是吞噬外来物的功能。小颗粒细胞起包裹、吞噬以及储存和释放酚氧化酶原系统的作用;而颗粒细胞细胞质内含有大量颗粒,酚氧化酶原(PO)及SOD等组分,不具有吞噬功能,但异物刺激可使这些功能颗粒释放到细胞外,从而实现细胞的免疫反应。Song等人利用注射方式使南美白对虾感染TSV病毒,2~3d后检测发现感染组血淋巴细胞总量,透明细胞以及颗粒细胞(半颗粒细胞和颗粒细胞)呈现显著性下降[3]。本研究采用瑞氏-Giemsa染色方法,对南美白对虾进行血细胞统计和分类,与Song等的研究结果相似,我们的研究结果显示TSV感染可导致对虾血淋巴细胞总数,透明细胞数以及颗粒细胞数(半颗粒细胞和颗粒细胞)呈现显著性下降,表明TSV可损伤免疫细胞,从而降低虾只的免疫力,导致其死亡。
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