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目的 建立重组结核杆菌融合蛋白(EC)[该制品名称是国家药典委员会确定的药品中文通用名称,“EC”为重组融合蛋白“结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶6(ESAT-6)和培养滤液蛋白10(CFP-10)”;简称“EC”]原液及成品的质量标准.方法 选取6批次EC原液及11批次EC成品、体质量300～400 g无特定病原体(SPF)级白色豚鼠21只、卡介苗(BCG)活菌菌液(1 mg/ml)、结核分枝杆菌减毒株H37Ra活菌菌液(2 mg/ml)作为实验材料,建立EC原液质量标准,包括残余抗生素活性检测、致敏效应实验、效价测定及动物法鉴别实验;建立EC成品质量标准,包括鉴别实验及效价测定;应用建立的质量检测标准对连续6批次EC原液和11批次EC成品进行检测,验证其适用性和可行性.结果 (1)EC原液残余抗生素活性检测.①专属性实验:磷酸盐缓冲液的吸光度值(A值)为1.736,卡那霉素标准品(0.0 ng/ml)的A值为2.178;②线性与范围实验:卡那霉素标准品在0.5～40.5 ng/ml范围内,连续3次实验回归方程拟合优度的判定系数R2均大于0.99;③准确性实验:连续3批次EC原液的卡那霉素残留量回收率分别为112.163％、117.285％、103.527％;④重复性实验:连续3批EC原液重复性实验A值相对标准偏差(RSD)分别为5.59％、9.18％、8.07％;⑤中间精密度实验:同一实验员不同时间及不同实验员检测连续3批次EC原液卡那霉素残留量检测均小于定量限0.5 ng/ml,为限量测定;⑥耐用性实验:改变读板时间(0、5、10 min)对EC原液卡那霉素残留量检测无影响,卡那霉素残留量均小于定量限0.5 ng/ml.(2)EC原液效价测定:稀释度为1 μg/ml(5 U/ml)、2.5 μg/ml(12.5 U/ml)、5 μg/ml(25 U/ml)及10 μg/ml(50 U/ml)时,每个稀释度对应的2批次EC原液动物皮肤试验的硬结或红晕平均直径及硬结或红晕平均直径总和比值分别为(15.17±0.88) mm、(13.67±1.25) mm、1.11 (91.00/82.00);(17.00±1.76) mm、(16.08±1.32) mm、1.06(102.00/96.50);(19.58±1.69) mm、(17.67±1.37)mm、1.11(117.50/106.00);(20.75±1.57) mm、(20.25±1.17) mm、1.02(124.50/121.50).(3)EC原液动物法鉴别实验;连续3批次EC原液动物皮肤试验的硬结或红晕平均直径均为0,TB-PPD动物皮肤试验的硬结平均直径为(15.13±5.06) mm.(4)EC成品鉴别试验:连续3个批次EC成品动物皮肤试验的硬结或红晕平均直径均为0,TB-PPD动物皮肤试验的硬结平均直径为(16.50±2.65) mm.(5)质量标准验证:①EC原液:残余抗生素活性检测结果均低于定量限0.5 ng/ml;致敏效应实验结果均为皮肤试验后豚鼠注射部位局部反应无明显区别,也无全身反应;每个稀释度[2.5 μg/ml(12.5 U/ml)、5μg/ml(25 U/ml)及10 μg/ml (50U/ml)]在皮内注射后24h所产生的局部硬结或红晕反应平均直径均≥8mm,与相应稀释度参考品的局部硬结或红晕平均直径总和的比值为0.9±0.1;动物法鉴别实验结果为EC原液对BCG活菌致敏组豚鼠的皮肤试验结果均呈阴性反应(硬结或红晕平均直径＜5 mm),而TB-PPD呈阳性反应(硬结平均直径≥5 mm).②EC成品检测:各批次成品对BCG活菌致敏组豚鼠的皮肤试验均呈阴性反应(硬结或红晕平均直径＜5 mm),而TB-PPD呈阳性反应(硬结平均直径≥5mm).结论 所建立的质量标准可用于EC原液及成品的检定.