【摘 要】
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目的检测慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)胶原酶基因prtC及其产物PrtC,了解PrtC水平与牙周病变程度的关系
【机 构】
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温州医科大学医学检验学院,浙江大学医学院附属第二医院口腔科,杭州,绍兴文理学院医学院
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目的检测慢性牙周炎(chronic periodontitis,CP)患者龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)胶原酶基因prtC及其产物PrtC,了解PrtC水平与牙周病变程度的关系,确定PrtC诱导细胞分泌炎性细胞因子的作用.方法采用SDS-PAGE检测原核表达系统重组PrtC(rPrtC)表达和Ni-NTA亲和层析法提取的rPrtC纯度.rPrtC免疫家兔获得抗血清.建立多重PCR检测56例CP患者209牙位的龈下菌斑标本中Pg 16S rDNA和prtC基因.建立ELISA检测上述标本中的PrtC,并分析PrtC水平与牙周病变程度的关系.采用ELISA检测rPrtC诱导人脐静脉内皮细胞EVC-304分泌IL-1α、IL-8和TNF-α的作用.结果 rPrtC表达产量约占细菌总蛋白的50%.提纯的rPrtC SDS-PAGE后仅见单一的蛋白条带.96.1%(201/209)和92.3%(193/209)的龈下菌斑标本分别Pg16SrDNA和prtC基因PCR阳性,91.4%的龈下菌斑标本(191/209)PrtC ELISA阳性.重度CP龈下菌斑标本中PrtC含量明显高于轻度和中度CP标本(P＜0.05),但轻度和中度、中度和重度CP标本之间PrtC含量差异无统计学意义(P＞0.05).1 μg的rPrtC作用EVC-304细胞24h后,5和10 μg的rPrtC作用EVC-304细胞12 h后均可使EVC-304细胞分泌的IL-1α、IL-8和TNF-α水平明显增高(P＜0.05).结论 Pg有很高的prtC基因携带率和表达率.CP牙周病变程度与龈下PrtC水平密切相关.rPrtC有直接诱导细胞合成并分泌IL-1α、IL-8和TNF-α的活性.
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