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【摘要】目的：探究急性心肌梗死（AMI）患者清LncRNA Hotairm1表达及其临床意义。方法：选取2019年12月到2020年9月我院收治的AMI患者45例作为研究组，选取同期45例健康者作为对照组。比较两组清LncRNA Hotairm1、cTnI及CK-MB水平差异，分析LncRNA Hotairm1对AMI的诊断价值。结果：研究组LncRNA Hotairm1相对表达量明显高于对照组（P<0.01）; LncRNA Hotairm1与AMI患者cTnI及CK-MB水平均呈正相关（r=0.391、0.432，P<0.001）;ROC曲线分析显示，LncRNA Hotairm1诊断AMI的曲线下面积为0.745，灵敏度为78.89%，特异度为89.25%。结论：AMI患者LncRNA Hotairm1表达明显升高，对AMI具有一定的诊断价值。
【关键词】急性心肌梗死;LncRNA Hotairm1; 诊断
【中图分类号】R542.22 【文献标识码】A 【DOI】
Expression of lncrna hotairm1 in serum of patients with acute myocardial infarction and its clinical significance
Xu Ming
（Heart Electrophysiology Room of Cangzhou People’s Hospital， Cangzhou， Hebei 061000）
【Abstract】Objective： To investigate the expression of lncrna hotairm1 in serum of patients with acute myocardial infarction （AMI） and its clinical significance. Methods： 45 patients with AMI treated in our hospital from December 2019 to September 2020 were selected as the study group， and 45 healthy people in the same period were selected as the control group. The levels of lncrna hotairm1， cTnI and CK-MB were compared between the two groups， and the diagnostic value of lncrna hotairm1 in AMI was analyzed. Results： the relative expression of lncrna hotairm1 in the study group was significantly higher than that in the control group （P<0.01）; Lncrna hotairm1 was positively correlated with cTnI and CK-MB levels in patients with AMI （r=0.391，0.432，P<0.001）; ROC curve analysis showed that the area under the curve of lncrna hotairm1 in the diagnosis of AMI was 0.745， the sensitivity was 78.89%， and the specificity was 89.25%. Conclusion： the expression of lncrna hotairm1 is significantly increased in patients with AMI， which has certain diagnostic value for AMI.
【Key words】 acute myocardial infarction; LncRNA Hotairm1; diagnosis
急性心肌梗死（AMI）是臨床常见和严重的心血管疾病，由于AMI极易出现充血性心力衰竭和恶性心律失常，患者死亡率极高[1]。虽然溶栓和经皮冠状动脉介入治疗 （PCI）的广泛应用已显著改善了 AMI 患者的预后，但仍有许多患者由于AMI 病因不明，最终发展为心力衰竭或心律失常[2]。因此，在积极探索AMI早期诊断的新型、高灵敏度和特异性的生物标志物对挽救患者生命及改善预后至关重要。Hotairm1位于人类hoxa1和hoxa2基因之间，被认为可能是髓系的特异性非编码RNA[3]。最近的研究发现Hotair在脓毒症小鼠心肌细胞中显著上调，在心力衰竭患者中则下调[4-5]。但其他心血管疾病中的表达水平和作用尚未被探讨。本研究旨在测定AMI患者清LncRNA Hotairm1的变化，探究其对AMI的诊断价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2019年12月到2020年9月我院收治的AMI患者45例作为研究对象，所有患者均符合AMI诊断标准[6]：缺血症状、心肌肌钙蛋白I（cTnI）和肌酸激酶-MB（CK-MB）表达增加以及病理性Q波;所有AMI患者均为首次确诊，发病至入院时间<4h，入院直接行PCI治疗。
将AMI患者作为研究组，另选取同期45例健康者作为对照组。各组年龄、性别、体重等一般临床资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经我院伦理学会批准进行。 1.2 方法
1.2.1样本采集
研究组患者在入院后立即通过直接静脉穿刺采集外周静脉血（5mL）至含柠檬酸钠的试管中，并以1000g离心5min;然后提取清部分，转移至不含RNase/DNA酶的试管中，并在-80℃下储存待测。对照组患者按照同样的方法采集外周静脉血样本。
1.2.2LncRNA Hotairm1表达检测
使用Trizol试剂（Invitrogen）从血清样本中提取总mRNA，并使用带有转录子第一链cDNA合成试剂盒（Roche）的oligo（dT）引物合成cDNA。使用SYBR Green PCR Master Mix（Applied Biosystems）进行定量扩增。使用MuLV逆转录酶（TransGen，批号：AT101-02）和引物构建反应体系，反应体积为20?l，采用U6表达作为内对照测定LncRNA Hotairm1相对表达含量。
1.3 观察指标
（1）两组清LncRNA Hotairm1表达、cTnI及CK-MB水平比较;（2）AMI患者LncRNA Hotairm1与AMI患者cTnI及CK-MB水平相关性;（3）LncRNA Hotairm1对AMI的诊断效能。
1.4 统计学方法
采用SPSS23.0进行统计学分析，计量资料用均数±标准差（x±s）描述，行t检验，相关性分析采用Pearson相关性分析，受试者P<0.05特征工作曲线（ROC）用于分析LncRNA Hotairm1对AMI的诊断价值。以P<0.05为比较差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组血清LncRNA Hotairm1表达、cTnI及CK-MB水平比较
研究组LncRNA Hotairm1相對表达量明显高于对照组，cTnI及CK-MB水平明显高于对照组，比较差异具有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.2 LncRNA Hotairm1对AMI的诊断价值
相关性分析结果显示，LncRNAHotairm1表达与AMI患者cTnI及CK-MB水平均呈正相关（r=0.391、0.432，P<0.001）。而ROC曲线分析结果显示，LncRNAHotairm1诊断AMI的曲线下面积为0.745，灵敏度为78.89%，特异度为89.25%。
3 讨论
长链非编码RNA（lncRNA）是长度大于200的核苷酸。随着基因分子生物学研究的深入，成千上万的lncRNA被证实参与了各种生物学过程，包括细胞生长、分化、细胞增殖和凋亡[7]。近年来国内外越来越多的研究显示，循环lncRNA，包括心脏、血管和肌肉特异性的lncRNA可作为多种心血管疾病的新型生物标志物[8-9]。Vausort等人的研究确定了5种lncRNA在AMI患者血液中的表达水平发生了巨大变化，其可能对AMI患者的预后具有重要预测价值[10]。有研究显示CoroMarker在心血管疾病患者中呈现出稳定性、敏感性和特异性，因此血清lncRNACoroMarker水平已被认为是诊断冠状动脉疾病的新型生物标志物[11]。此外，循环lncRNAUCA1水平也被确定为AMI预后的潜在新型生物标志物[12]。这些研究说明在心血管疾病中，循环lncRNA的图谱发生了改变，提示其作为心血管疾病，尤其是AMI的分子诊断和预后生物标志物具有巨大潜力。
Hotair是lncRNA Hox的反义非编码RNA，是从Hoxc位点转录的2.2kb lncRNA。Hotairm1位于人类hoxa1和hoxa2基因之间，被认为是一种髓系特异性非编码RNA[2]。之前有研究表明Hotair在脓毒症小鼠心肌细胞中显著上调[2]。而在肺癌中，Hotairm1被发现呈低表达，且晚期患者Hotairm1表达明显低于早期患者[13]。但zhang等[14]的研究发现，Hotairm1在心肌细胞分化过程中呈过表达，提示该基因可能在心血管系统中也具有特定的作用，但并未对该作用进行明确。可见，lncRNA Hotairm1可能在不同疾病中具有不同的表达特点及作用。
本研究通过检测AMI患者血清lncRNA Hotairm1表达水平发现，与健康者相比，AMI患者lncRNA Hotairm1表达明显升高，且lncRNA Hotairm1表达与患者cTnI及CK-MB水平均呈正相关（r=0.391、0.432），提示lncRNA Hotairm1在AMI发病中具有重要作用。通过进一步ROC曲线分析结果显示，LncRNA Hotairm1诊断AMI的曲线下面积为0.745，灵敏度为78.89%，特异度为89.25%，说明LncRNA Hotairm1对AMI具有诊断作用，是AMI早期诊断的潜在生物标志物。
综上所述，AMI患者LncRNA Hotairm1表达明显升高，是AMI早期诊断极具潜力的循环生物标志物，值得临床进一步深入研究，明确其在AMI中的作用机制。
参考文献：
[1]季润青， 余苑， 李静. 急性心肌梗死指南推荐治疗在我国应用现状[J]. 中国循证心血管医学杂志， 2020， 12（2）：127-129.
[2] Sacco L D ， Baldassarre A ， Masotti A . Bioinformatics Tools and Novel Challenges in Long Non-Coding RNAs （lncRNAs） Functional Analysis[J]. International Journal of Molecular Sciences， 2012， 13（1）. [3] Lu G ， Yuan L ， Guo S ， et al. Circulating Long Noncoding RNA HOTAIR is an Essential Mediator of Acute Myocardial Infarction[J]. Cellular Physiology & Biochemistry International Journal of Experimental Cellular Physiology Biochemistry & Pharmacology， 2017， 44（4）：1497.
[4]林浩， 崔金帅， 李勇男，等. 长链非编码RNA与心血管疾病关系的研究进展[J]. 山东医药， 2019， 59（5）：93-96.
[5]Hai-Xi， Sun， Nam-Hai， et al. Bioinformatics Approaches to Studying Plant Long Noncoding RNAs （lncRNAs）： Identification and Functional Interpretation of lncRNAs from RNA-Seq Data Sets.[J]. Methods in molecular biology （Clifton， N.J.）， 2019， 1933（15）：197-205.
[6]季润青， 余苑， 李静. 急性心肌梗死指南推荐治疗在我国应用现状[J]. 中国循证心血管医学杂志， 2020， v.12（02）：127-129.
[7]李思维. 长链非编码RNA（lncRNA）在癌症中的作用[J]. 实用肿瘤学杂志， 2019， 33（5）：471-475.
[8] Kumarswamy R ， Bauters C ， Volkmann I ， et al. Circulating long noncoding RNA， LIPCAR， predicts survival in patients with heart failure[J]. Circulation Research， 2014， 114（10）：1569-1575.
[9]王勇，王贤恩，雷玉华.长链非编码RNA在急性心肌梗死中的研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志， 2019， 17（3）：388-390.
[10] Long noncoding RNAs in patients with acute myocardial infarction[J]. Circulation Research， 2014， 115（7）：668-677.
[11]Yang Y ，Cai Y，Wu G， et al.Plasma long non-coding RNA， CoroMarker， a novel biomarker for diagnosis of coronary artery disease[J]. Clinical Science， 2015， 129（8）：675-685.
[12]Yan Y，Zhang B，Ning L，et al.Circulating Long Noncoding RNA UCA1 as a Novel Biomarker of Acute Myocardial Infarction[J]. BioMed Research International， 2016，（34）：1-7.
[13]瞿磊、嚴文军、贺升文、贺茂俊. 血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平与肺癌发病风险的关联分析[J]. 当代医学， 2020， 583（32）：12-17.
[14] Zhang X ， Lian Z ， Padden C ， et al. A myelopoiesis-associated regulatory intergenic noncoding RNA transcript within the human HOXA cluster.[J]. Blood， 2009， 113（11）：2526-34.
【关键词】急性心肌梗死;LncRNA Hotairm1; 诊断
【中图分类号】R542.22 【文献标识码】A 【DOI】
Expression of lncrna hotairm1 in serum of patients with acute myocardial infarction and its clinical significance
Xu Ming
（Heart Electrophysiology Room of Cangzhou People’s Hospital， Cangzhou， Hebei 061000）
【Abstract】Objective： To investigate the expression of lncrna hotairm1 in serum of patients with acute myocardial infarction （AMI） and its clinical significance. Methods： 45 patients with AMI treated in our hospital from December 2019 to September 2020 were selected as the study group， and 45 healthy people in the same period were selected as the control group. The levels of lncrna hotairm1， cTnI and CK-MB were compared between the two groups， and the diagnostic value of lncrna hotairm1 in AMI was analyzed. Results： the relative expression of lncrna hotairm1 in the study group was significantly higher than that in the control group （P<0.01）; Lncrna hotairm1 was positively correlated with cTnI and CK-MB levels in patients with AMI （r=0.391，0.432，P<0.001）; ROC curve analysis showed that the area under the curve of lncrna hotairm1 in the diagnosis of AMI was 0.745， the sensitivity was 78.89%， and the specificity was 89.25%. Conclusion： the expression of lncrna hotairm1 is significantly increased in patients with AMI， which has certain diagnostic value for AMI.
【Key words】 acute myocardial infarction; LncRNA Hotairm1; diagnosis
急性心肌梗死（AMI）是臨床常见和严重的心血管疾病，由于AMI极易出现充血性心力衰竭和恶性心律失常，患者死亡率极高[1]。虽然溶栓和经皮冠状动脉介入治疗 （PCI）的广泛应用已显著改善了 AMI 患者的预后，但仍有许多患者由于AMI 病因不明，最终发展为心力衰竭或心律失常[2]。因此，在积极探索AMI早期诊断的新型、高灵敏度和特异性的生物标志物对挽救患者生命及改善预后至关重要。Hotairm1位于人类hoxa1和hoxa2基因之间，被认为可能是髓系的特异性非编码RNA[3]。最近的研究发现Hotair在脓毒症小鼠心肌细胞中显著上调，在心力衰竭患者中则下调[4-5]。但其他心血管疾病中的表达水平和作用尚未被探讨。本研究旨在测定AMI患者清LncRNA Hotairm1的变化，探究其对AMI的诊断价值。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取我院2019年12月到2020年9月我院收治的AMI患者45例作为研究对象，所有患者均符合AMI诊断标准[6]：缺血症状、心肌肌钙蛋白I（cTnI）和肌酸激酶-MB（CK-MB）表达增加以及病理性Q波;所有AMI患者均为首次确诊，发病至入院时间<4h，入院直接行PCI治疗。
将AMI患者作为研究组，另选取同期45例健康者作为对照组。各组年龄、性别、体重等一般临床资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经我院伦理学会批准进行。 1.2 方法
1.2.1样本采集
研究组患者在入院后立即通过直接静脉穿刺采集外周静脉血（5mL）至含柠檬酸钠的试管中，并以1000g离心5min;然后提取清部分，转移至不含RNase/DNA酶的试管中，并在-80℃下储存待测。对照组患者按照同样的方法采集外周静脉血样本。
1.2.2LncRNA Hotairm1表达检测
使用Trizol试剂（Invitrogen）从血清样本中提取总mRNA，并使用带有转录子第一链cDNA合成试剂盒（Roche）的oligo（dT）引物合成cDNA。使用SYBR Green PCR Master Mix（Applied Biosystems）进行定量扩增。使用MuLV逆转录酶（TransGen，批号：AT101-02）和引物构建反应体系，反应体积为20?l，采用U6表达作为内对照测定LncRNA Hotairm1相对表达含量。
1.3 观察指标
（1）两组清LncRNA Hotairm1表达、cTnI及CK-MB水平比较;（2）AMI患者LncRNA Hotairm1与AMI患者cTnI及CK-MB水平相关性;（3）LncRNA Hotairm1对AMI的诊断效能。
1.4 统计学方法
采用SPSS23.0进行统计学分析，计量资料用均数±标准差（x±s）描述，行t检验，相关性分析采用Pearson相关性分析，受试者P<0.05特征工作曲线（ROC）用于分析LncRNA Hotairm1对AMI的诊断价值。以P<0.05为比较差异有统计学意义。
2 结果
2.1 两组血清LncRNA Hotairm1表达、cTnI及CK-MB水平比较
研究组LncRNA Hotairm1相對表达量明显高于对照组，cTnI及CK-MB水平明显高于对照组，比较差异具有统计学意义（P<0.01）。见表1。
2.2 LncRNA Hotairm1对AMI的诊断价值
相关性分析结果显示，LncRNAHotairm1表达与AMI患者cTnI及CK-MB水平均呈正相关（r=0.391、0.432，P<0.001）。而ROC曲线分析结果显示，LncRNAHotairm1诊断AMI的曲线下面积为0.745，灵敏度为78.89%，特异度为89.25%。
3 讨论
长链非编码RNA（lncRNA）是长度大于200的核苷酸。随着基因分子生物学研究的深入，成千上万的lncRNA被证实参与了各种生物学过程，包括细胞生长、分化、细胞增殖和凋亡[7]。近年来国内外越来越多的研究显示，循环lncRNA，包括心脏、血管和肌肉特异性的lncRNA可作为多种心血管疾病的新型生物标志物[8-9]。Vausort等人的研究确定了5种lncRNA在AMI患者血液中的表达水平发生了巨大变化，其可能对AMI患者的预后具有重要预测价值[10]。有研究显示CoroMarker在心血管疾病患者中呈现出稳定性、敏感性和特异性，因此血清lncRNACoroMarker水平已被认为是诊断冠状动脉疾病的新型生物标志物[11]。此外，循环lncRNAUCA1水平也被确定为AMI预后的潜在新型生物标志物[12]。这些研究说明在心血管疾病中，循环lncRNA的图谱发生了改变，提示其作为心血管疾病，尤其是AMI的分子诊断和预后生物标志物具有巨大潜力。
Hotair是lncRNA Hox的反义非编码RNA，是从Hoxc位点转录的2.2kb lncRNA。Hotairm1位于人类hoxa1和hoxa2基因之间，被认为是一种髓系特异性非编码RNA[2]。之前有研究表明Hotair在脓毒症小鼠心肌细胞中显著上调[2]。而在肺癌中，Hotairm1被发现呈低表达，且晚期患者Hotairm1表达明显低于早期患者[13]。但zhang等[14]的研究发现，Hotairm1在心肌细胞分化过程中呈过表达，提示该基因可能在心血管系统中也具有特定的作用，但并未对该作用进行明确。可见，lncRNA Hotairm1可能在不同疾病中具有不同的表达特点及作用。
本研究通过检测AMI患者血清lncRNA Hotairm1表达水平发现，与健康者相比，AMI患者lncRNA Hotairm1表达明显升高，且lncRNA Hotairm1表达与患者cTnI及CK-MB水平均呈正相关（r=0.391、0.432），提示lncRNA Hotairm1在AMI发病中具有重要作用。通过进一步ROC曲线分析结果显示，LncRNA Hotairm1诊断AMI的曲线下面积为0.745，灵敏度为78.89%，特异度为89.25%，说明LncRNA Hotairm1对AMI具有诊断作用，是AMI早期诊断的潜在生物标志物。
综上所述，AMI患者LncRNA Hotairm1表达明显升高，是AMI早期诊断极具潜力的循环生物标志物，值得临床进一步深入研究，明确其在AMI中的作用机制。
参考文献：
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[8] Kumarswamy R ， Bauters C ， Volkmann I ， et al. Circulating long noncoding RNA， LIPCAR， predicts survival in patients with heart failure[J]. Circulation Research， 2014， 114（10）：1569-1575.
[9]王勇，王贤恩，雷玉华.长链非编码RNA在急性心肌梗死中的研究进展[J].中西医结合心脑血管病杂志， 2019， 17（3）：388-390.
[10] Long noncoding RNAs in patients with acute myocardial infarction[J]. Circulation Research， 2014， 115（7）：668-677.
[11]Yang Y ，Cai Y，Wu G， et al.Plasma long non-coding RNA， CoroMarker， a novel biomarker for diagnosis of coronary artery disease[J]. Clinical Science， 2015， 129（8）：675-685.
[12]Yan Y，Zhang B，Ning L，et al.Circulating Long Noncoding RNA UCA1 as a Novel Biomarker of Acute Myocardial Infarction[J]. BioMed Research International， 2016，（34）：1-7.
[13]瞿磊、嚴文军、贺升文、贺茂俊. 血浆LncRNA-HOTAIRM1表达水平与肺癌发病风险的关联分析[J]. 当代医学， 2020， 583（32）：12-17.
[14] Zhang X ， Lian Z ， Padden C ， et al. A myelopoiesis-associated regulatory intergenic noncoding RNA transcript within the human HOXA cluster.[J]. Blood， 2009， 113（11）：2526-34.