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【摘 要】目的：探討喉鳞癌病人血清中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和血管内皮生长因子一C （VEGF-C）的检测的价值。方法：选取经病理切片证实的喉鳞癌病人82例， 良性喉部病变组70例， 健康人血清45例， 空腹抽取静脉血3ml检测MMP-9和VEGF-C， 并探讨两者与喉鳞癌生物学特性的关系。结果：MMP- 9水平对照组、良性组和恶性组相比较均有统计学意义（ P< 0. 05），VEGF-C水平对照组、良性组和恶性组比较均有显著的统计学意义（ P< 0. 05），MMP-9 表达与VEGF 表达之间存在正相关，（r=0.512，P< 0. 05）。结论：MMP- 9及VEGF均在喉鳞癌的表达有较高的敏感性， 两者对喉癌的分期， 转移及预后有较密切的联系。有可能成为喉癌诊断治疗的生物学指标。
【关键词】喉肿瘤；基质金属蛋白酶-9；血管内皮生长因子-C
【中图分类号】R739.65 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）04-2138-02
喉癌是一种恶性肿瘤，喉癌发病率约占全身肿瘤的1～5%，最常见的喉癌为喉鳞状细胞癌， 约占95%～98%， 喉癌发生的确切机理、侵袭和转移的分子机制还不十分清楚。目前普遍认为细胞外基质和基底膜是恶性肿瘤浸润与转移的重要组织屏障。基质金属蛋白酶- 9 （matrix metalloprote inase- 9，MMP- 9）是基质金属蛋白酶中的一员， 能降解基底膜和细胞外基质的大部分成分， 而参与肿瘤的发生发展。血管内皮生长因子（VEGF）是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子（heparin-binding growth factor），可在体内诱导血管新生，对肿瘤的生长、浸润和转移起重要作用，可作为肿瘤代谢及转移的标志物。
1 对象和方法
1.1 对象： 2011年11月至2013年10月在山西省人民医院耳鼻喉科住院治疗的喉鳞癌病人82例，年龄35～78岁，平均年龄57.1岁；良性喉部病变患者组70例， 年龄为31～75岁，平均年龄55.2岁。对照组：45例，为同期健康体检者，年龄30～82岁，平均年龄56.2岁。三组在年龄性别等方面均无统计学差异（ P> 0. 05）。
1.2 方法
1.2.1 标本收集： 空腹采集静脉血3ml， 于3000 r/min 离心15min，取血清置放于- 80℃低温冰箱中保存。采用ELISA 法检测血浆标本中MMP-9 和VEGF-C。ELISA方法检测，试剂盒为美国R &B 公司原装进口试剂， 严格按照产品说明进行操作。
1.2.2 统计学处理： 采用SPSS12. 0统计软件进行数据处理， 参数用均数±标准差（ x ±s） 表示， 采用t 检验进行统计学处理， P< 0. 05为有显著性差异。
2 结果
2.1 各组MMP- 9和VEGF-C的表达
MMP- 9水平：恶性组（123.15±51.76）ng /ml， 良性组（75.81±18.21）对照组（74.13±14.84）ng/ml，良性组、对照组和恶性组比较均有统计学意义（P<0. 05）。VEGF-C水平： 恶性组（324.5±71.76） pg /ml， 良性组（110.2±21.56） pg /ml， 对照组（108.4±19.77） pg /ml；良性组、对照组和恶性组比较均有显著的统计学意义（ P< 0. 05）
2.2 喉鳞癌患者血清MMP-9和VEGF-C水平进行相关性分析 结果显示呈正相关（ r = 0. 522、P < 0. 05） ，说明随喉鳞癌患者血清MMP-9水平的升高，VEGF-C水平也随之增高。
3 讨论
喉鳞癌的发生发展是多因素、多阶段的复杂过程， 涉及多个基因和多种分子水平变化。喉癌发病率有明显的增长趋势，其原因可能与空气污染的加重、吸烟、某些职业的长期接触致癌物质有关，这与喉癌的发病率城市高于农村，空气污染重的重工业城市高于污染轻的轻工业城市相符合。喉部恶性肿瘤中最常见的是鳞状细胞癌。肿瘤细胞的浸入与转移首先发生基膜的降解，在这个过程中MMP-9发挥了重要作用。近年来一些研究表明许多恶性肿瘤细胞可以产生MMP-9，通过旁分泌作用于癌基质，破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭和转移的一系列过程中，基质金属蛋白酶起到了重要的作用。恶性肿瘤的侵袭与转移是一个复杂的病理生理过程，MMP-9 在头颈部肿瘤中呈现过度表达，MMP-9 过度表达是喉鳞癌中最有意义的肿瘤标志物[1]。本研究发现，MMP-9水平分别在恶性组的表达均高于良性组及正常对照组， 比较均有统计学意义（ P< 0. 05）。与已往研究相类似， MMP-9的表达与喉癌的生存密切相关， 表明MMP-9有可能成为喉癌预后的新的生物学指标。
肿瘤生长必须依赖血管生成，若没有新生血管长入，一个肿瘤克隆灶不会超过2mm。VEGF-C是最重要的血管生成因子，可作为肿瘤代谢及转移的标志物[2]。VEGF一C于1996年被分离纯化，是一种特异的血管、淋巴管内皮细胞调节因子。VEGF能直接刺激肿瘤血管的增生，并可增加血管的通透性， 促进肿瘤细胞的渗出和转移灶的形成[3]。人类VEGF一C基因定位于染色体4q34，分子量21 KD，近年来的研究表明，VEGF一C在人类多种肿瘤中表达。本文研究显示， 喉鳞癌患者血清VEGF-C水平显著高于喉部良性肿瘤组和对照组，比较均有统计学意义（ P< 0. 05）。Kim 等[4]利用抗VEGF抗体成功抑制了裸鼠的一些肿瘤细胞系生长的实验成果进一步证实VEGF-C在恶性肿瘤的生长和转移中的作用。
本实验还发现， 在喉鳞癌组织中MMP-9与VEGF-C含量呈正相关。与Riedel 等[5]研究的喉癌与肺癌中VEGF-C与MMP-9的水平相一致，推测VEGF能促进喉癌浸润转移的机制之一可能是VEGF 上调喉癌细胞MMP-9 的表达；MMP-9可通过释放VEGF以参与血管生成。说明MMP- 9及VEFG-C在喉鳞癌组织中表达上调，作为喉鳞癌发生发展诸多因素中的敏感指标，两者对喉癌的分期， 临床生物学特征的判断， 转移及预后有较密切的联系， 联合检测MMP-9和VEFG-C可能对判断喉鳞癌的分期、转移及预后有重要价值。
参考文献：
[1] 葛明华，谷志远， 徐晓红等. 头颈部粘膜鳞状细胞癌患者血清血管内皮生长因子[J]. 现代口腔医学杂志，2003，17（6）：507-508.
[2] X ieM， Sun Y， L iY. Expression ofM at rixMeta-l loproteinases in Suprag lottic Carcinoma and It，s Clinical Imp licat ion for Est imating Lymph Node Metastases[ J] . Laryngoscope， 2004， 114（12）：2243- 2249.
[3] Auerbach R， Lewis R， Shinners B， et al. Angiogenesis assays： a criticaloverview [J]. Clin Chem，2003，49（1）：32-40.
[4] Kim KJ， Winer J， Armanini M， et al. Inhibit ion of vascular -endothelial - growth - fact or - induced angiogenesis suppresses tumour growth in vivo. Nature（ Lond ） ， 1993， 362 （ 6423 ） ： 841 -844.
[5] Riedel F， Gotte K， Schwald J， et al. Expression of 92-kDa type Ⅳ collagenase correlates with angiogenic markers and poor survival in head and neck squamous cell carcinoma [J]. Int J Oncol，2000，17：1099-1105.
【关键词】喉肿瘤；基质金属蛋白酶-9；血管内皮生长因子-C
【中图分类号】R739.65 【文献标识码】B 【文章编号】1004-7484（2014）04-2138-02
喉癌是一种恶性肿瘤，喉癌发病率约占全身肿瘤的1～5%，最常见的喉癌为喉鳞状细胞癌， 约占95%～98%， 喉癌发生的确切机理、侵袭和转移的分子机制还不十分清楚。目前普遍认为细胞外基质和基底膜是恶性肿瘤浸润与转移的重要组织屏障。基质金属蛋白酶- 9 （matrix metalloprote inase- 9，MMP- 9）是基质金属蛋白酶中的一员， 能降解基底膜和细胞外基质的大部分成分， 而参与肿瘤的发生发展。血管内皮生长因子（VEGF）是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子（heparin-binding growth factor），可在体内诱导血管新生，对肿瘤的生长、浸润和转移起重要作用，可作为肿瘤代谢及转移的标志物。
1 对象和方法
1.1 对象： 2011年11月至2013年10月在山西省人民医院耳鼻喉科住院治疗的喉鳞癌病人82例，年龄35～78岁，平均年龄57.1岁；良性喉部病变患者组70例， 年龄为31～75岁，平均年龄55.2岁。对照组：45例，为同期健康体检者，年龄30～82岁，平均年龄56.2岁。三组在年龄性别等方面均无统计学差异（ P> 0. 05）。
1.2 方法
1.2.1 标本收集： 空腹采集静脉血3ml， 于3000 r/min 离心15min，取血清置放于- 80℃低温冰箱中保存。采用ELISA 法检测血浆标本中MMP-9 和VEGF-C。ELISA方法检测，试剂盒为美国R &B 公司原装进口试剂， 严格按照产品说明进行操作。
1.2.2 统计学处理： 采用SPSS12. 0统计软件进行数据处理， 参数用均数±标准差（ x ±s） 表示， 采用t 检验进行统计学处理， P< 0. 05为有显著性差异。
2 结果
2.1 各组MMP- 9和VEGF-C的表达
MMP- 9水平：恶性组（123.15±51.76）ng /ml， 良性组（75.81±18.21）对照组（74.13±14.84）ng/ml，良性组、对照组和恶性组比较均有统计学意义（P<0. 05）。VEGF-C水平： 恶性组（324.5±71.76） pg /ml， 良性组（110.2±21.56） pg /ml， 对照组（108.4±19.77） pg /ml；良性组、对照组和恶性组比较均有显著的统计学意义（ P< 0. 05）
2.2 喉鳞癌患者血清MMP-9和VEGF-C水平进行相关性分析 结果显示呈正相关（ r = 0. 522、P < 0. 05） ，说明随喉鳞癌患者血清MMP-9水平的升高，VEGF-C水平也随之增高。
3 讨论
喉鳞癌的发生发展是多因素、多阶段的复杂过程， 涉及多个基因和多种分子水平变化。喉癌发病率有明显的增长趋势，其原因可能与空气污染的加重、吸烟、某些职业的长期接触致癌物质有关，这与喉癌的发病率城市高于农村，空气污染重的重工业城市高于污染轻的轻工业城市相符合。喉部恶性肿瘤中最常见的是鳞状细胞癌。肿瘤细胞的浸入与转移首先发生基膜的降解，在这个过程中MMP-9发挥了重要作用。近年来一些研究表明许多恶性肿瘤细胞可以产生MMP-9，通过旁分泌作用于癌基质，破坏肿瘤细胞侵袭的组织学屏障，在肿瘤侵袭和转移的一系列过程中，基质金属蛋白酶起到了重要的作用。恶性肿瘤的侵袭与转移是一个复杂的病理生理过程，MMP-9 在头颈部肿瘤中呈现过度表达，MMP-9 过度表达是喉鳞癌中最有意义的肿瘤标志物[1]。本研究发现，MMP-9水平分别在恶性组的表达均高于良性组及正常对照组， 比较均有统计学意义（ P< 0. 05）。与已往研究相类似， MMP-9的表达与喉癌的生存密切相关， 表明MMP-9有可能成为喉癌预后的新的生物学指标。
肿瘤生长必须依赖血管生成，若没有新生血管长入，一个肿瘤克隆灶不会超过2mm。VEGF-C是最重要的血管生成因子，可作为肿瘤代谢及转移的标志物[2]。VEGF一C于1996年被分离纯化，是一种特异的血管、淋巴管内皮细胞调节因子。VEGF能直接刺激肿瘤血管的增生，并可增加血管的通透性， 促进肿瘤细胞的渗出和转移灶的形成[3]。人类VEGF一C基因定位于染色体4q34，分子量21 KD，近年来的研究表明，VEGF一C在人类多种肿瘤中表达。本文研究显示， 喉鳞癌患者血清VEGF-C水平显著高于喉部良性肿瘤组和对照组，比较均有统计学意义（ P< 0. 05）。Kim 等[4]利用抗VEGF抗体成功抑制了裸鼠的一些肿瘤细胞系生长的实验成果进一步证实VEGF-C在恶性肿瘤的生长和转移中的作用。
本实验还发现， 在喉鳞癌组织中MMP-9与VEGF-C含量呈正相关。与Riedel 等[5]研究的喉癌与肺癌中VEGF-C与MMP-9的水平相一致，推测VEGF能促进喉癌浸润转移的机制之一可能是VEGF 上调喉癌细胞MMP-9 的表达；MMP-9可通过释放VEGF以参与血管生成。说明MMP- 9及VEFG-C在喉鳞癌组织中表达上调，作为喉鳞癌发生发展诸多因素中的敏感指标，两者对喉癌的分期， 临床生物学特征的判断， 转移及预后有较密切的联系， 联合检测MMP-9和VEFG-C可能对判断喉鳞癌的分期、转移及预后有重要价值。
参考文献：
[1] 葛明华，谷志远， 徐晓红等. 头颈部粘膜鳞状细胞癌患者血清血管内皮生长因子[J]. 现代口腔医学杂志，2003，17（6）：507-508.
[2] X ieM， Sun Y， L iY. Expression ofM at rixMeta-l loproteinases in Suprag lottic Carcinoma and It，s Clinical Imp licat ion for Est imating Lymph Node Metastases[ J] . Laryngoscope， 2004， 114（12）：2243- 2249.
[3] Auerbach R， Lewis R， Shinners B， et al. Angiogenesis assays： a criticaloverview [J]. Clin Chem，2003，49（1）：32-40.
[4] Kim KJ， Winer J， Armanini M， et al. Inhibit ion of vascular -endothelial - growth - fact or - induced angiogenesis suppresses tumour growth in vivo. Nature（ Lond ） ， 1993， 362 （ 6423 ） ： 841 -844.
[5] Riedel F， Gotte K， Schwald J， et al. Expression of 92-kDa type Ⅳ collagenase correlates with angiogenic markers and poor survival in head and neck squamous cell carcinoma [J]. Int J Oncol，2000，17：1099-1105.