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恶性胶质瘤是最常见的严重危害人类健康的颅内肿瘤之一。由于其呈浸润性生长,多与脑组织无明显分界,手术难以全切,故术后复发率高,生存率低;而常用抗肿瘤药物对机体损害大、毒副作用强;且肿瘤细胞易产生耐药性,影响治疗效果[1]。所以,研究治疗脑恶性胶质瘤的方法和药物已成为脑恶性胶质瘤治疗中的热点问题[2]。研究证实,药物治疗脑恶性胶质瘤主要是通过诱导细胞凋亡来实现,因此,探讨治疗方法和药物对脑恶性胶质瘤细胞的凋亡的影响,具有重要的意义。随着对中药治疗恶性胶质瘤的相关研究不断展开,中药抗恶性胶质瘤的作用已被证实[8]。作为中医气机升降理论中的重要组成部分,中药通过升降的不同特性发挥着治疗肿瘤的作用[9]。于是,我们以导师王宗仁教授临床实践为基础,结合古代医案中筛选出治疗脑肿瘤的出现频次最高的中药,观其抗恶性胶质瘤的作用效果,为进一步研发治疗恶性胶质瘤的中药提供可靠的实验依据。随着航天生命科学的发展，研究者发现，失重或模拟微重力能够减慢细胞生长，影响期周期，促进其凋亡，而恶性胶质瘤细胞具有增值快、细胞周期失控和抗凋亡等特性，因此，我们选用模拟微重力这一与提升作用类似的手段对恶性胶质瘤细胞U251 MG进行干预,观察其对细胞增殖、细胞周期,以及细胞凋亡的影响。第一部分基于中医古籍挖掘的治疗脑肿瘤高频药物分析目的:筛选古代医籍中,即具有升降作用,又具有抗脑肿瘤作用的高频药物。方法:应用文本发掘的方法,收集整理古代治疗脑肿瘤的医籍,提取医案;运用Microsoft Access软件建立古代脑肿瘤病医案的数据库,运用SAS 9.1统计软件和频数的数理统计方法对治疗脑肿瘤的高频药物进行挖掘分析,筛选出治疗脑肿瘤的高频药物。结果:在343份古籍医案中,共记录143味中药,高频药物集中在前32味,其中以累积频率达77.53%。其中,具升调作用的中药有11个,占整个高频药物群的34.37%。频次最高的为具有升提作用的中药延胡索。结论:具有升提作用的延胡索是筛选出的治疗脑肿瘤频次最高的中药。第二部分dl-THP抗恶性胶质瘤的作用及机制研究实验一dl-THP对U251MG凋亡及p53和p21表达的影响目的:观察不同浓度的dl-THP对U251MG凋亡以及p53和下游p21表达的影响。方法:用不同浓度的dl-THP干预U251MG,采用CCK-8法检测U251MG增殖能力,流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;选用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白p53、p21的表达,同时,采用p53抑制剂PFT-α与dl-THP联合处理U251MG,观察U251MG增殖和凋亡。结果:(1)不同浓度的dl-THP干预U251MG后,U251MG的增殖均明显受到抑制(P<0.01),并呈浓度依赖性;(2)U251MG凋亡率随干预浓度的升高而增加(P<0.01);(3)U251MG中p53和p21的表达上调(P<0.01),PFT-α与dl-THP联合处理U251MG后,U251MG的增殖和凋亡被抑制。结论:dl-THP能在体外抑制U251MG的增殖,并促进凋亡,其促进凋亡的机制可能与p53被激活及其下游的p21生成及稳定表达有关。实验二dl-THP对U251MG荷瘤裸鼠的抑瘤作用及p53和p21表达的影响目的:观察dl-THP对U251MG荷瘤裸鼠抗恶性胶质瘤作用及对p53和p21蛋白表达的影响。方法:将U251MG种植于BALB/C-nu裸鼠皮下,建立U251MG荷瘤裸鼠模型。连续给予dl-THP(1mg/Kg/day,2mg/Kg/day)10d后,剥离瘤体,称重、测量体积、计算抑瘤率,并观察模型小鼠生存时间;采用免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测dl-THP治疗后瘤体组织内p53和p21蛋白的表达。结果:(1)dl-THP干预组的抑瘤率分别为54.2%(dl-THP 1mg/Kg/day)和65.9%(dl-THP2mg/Kg/day),与对照组相比具有显著的差异性(P<0.01);(2)dl-THP干预组最长生存时间为34d;(3)瘤体组织内的p53和p21的蛋白表达上调(P<0.01)。结论:dl-THP能明显抑制瘤组织增长,延长荷瘤小鼠的生存时间,其作用机制可能与瘤体组织内的p53和p21蛋白表达上调促进恶性胶质瘤细胞凋亡有关。第三部分模拟微重力对U251MG凋亡及p21和IGFBP-2表达的影响目的:观察模拟微重力对U251MG的增殖、细胞周期和凋亡的影响及促凋亡的机制。方法:在模拟微重力干预U251MG 12h、24h、48h、72h后,采用CCK-8法检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期;透射电子显微镜、流式细胞术和TUNEL法观察细胞凋亡;采用荧光玻片蛋白芯片筛选与凋亡相关的细胞因子,并选用蛋白免疫印迹法和实时定量PCR检测模拟微重力对凋亡相关蛋白IGFBP-2和p21蛋白及m RNA表达。结果:(1)模拟微重力干预12h、24h、48h、72h后,U251MG的增殖明显受到抑制(P<0.01),并具有时间依赖性;(2)U251MG的细胞周期分布发生明显改变(P<0.01),且随模拟微重力干预时间的增加,逐渐由S期阻滞渐向G0/G1期阻滞转变;(3)U251MG凋亡数量增加(P<0.01),凋亡率随着干预时间的延长而增加(P<0.01),并出现结构和形态的改变;(4)U251MG中p21的蛋白和m RNA表达上调,相反,IGFBP-2的表达下调(P<0.01)。结论:模拟微重力能抑制U251MG增殖、阻滞其细胞周期及促进其凋亡;凋亡发生的机制可能与p21和IGFBP-2的表达异常有关。