【摘 要】
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目的:研究Cyclin B1敲低后差异表达的基因,并筛选出与自噬相关的基因。方法:利用胸腺核苷(TdR)双阻断法使鼻咽癌细胞CNE-2周期同步化至S期,siRNA干扰Cyclin B1的表达,流式细
【基金项目】
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福建省自然科学基金（2015J01457）
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目的:研究Cyclin B1敲低后差异表达的基因,并筛选出与自噬相关的基因。方法:利用胸腺核苷(TdR)双阻断法使鼻咽癌细胞CNE-2周期同步化至S期,siRNA干扰Cyclin B1的表达,流式细胞术验证转染效率,q-PCR和western blot验证siRNA沉默效率,高通量基因芯片筛选对照组和实验组差异表达的基因。结果:经2.5mmol/L的TdR同步化后,流式细胞仪检测细胞周期,获得S期细胞。用脂质体转染法将FAM-siRNA导入CNE-2细胞后,流式细胞术检测转染效率为85.6%,将Cyclin B1-siRNA导入CNE-2细胞后,Cyclin B1的mRNA和蛋白表达均较对照组明显下降85%(P<0.01)。基因芯片结果显示与对照组相比,转染Cyclin B1-siRNA后一共有2 408个差异表达的基因,其中1 245个基因显著上调,1 163个基因显著下调,初步筛选出上调的自噬相关基因PTEN。结论:Cyclin B1-siRNA可以有效地沉默Cyclin B1蛋白的表达,并可以使2408个基因差异表达,初步筛选出上调的自噬相关基因PTEN。
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