目的:建立同时检测小鼠血浆、脑匀浆中葛根素和梓醇浓度的HPLC-MS/MS法,为梓葛制剂的药动学研究提供检测方法。方法:分别以对羟基苯甲醛和桃叶珊瑚苷为葛根素、梓醇的内标物,血浆或脑匀浆沉淀蛋白后,采用HPLC-MS/MS法同时检测各物质。色谱条件:采用Eclipse plus C₁₈（100 mm×4.6 mm,3.5μm）色谱柱,以甲醇^-10 mmol·L^-1乙酸胺（含0.1%甲酸）（80∶20）为流动相,流速0.6 m L·min^-1,柱温30℃;质谱条件:电喷雾离子化源,多重反应监测,葛根素和对羟基苯甲醛采用负离子方式（选择监测离子反应分别为m/z 415.0→295.0和m/z 120.9→91.8）,梓醇和桃叶珊瑚苷采用正离子方式（选择监测离子反应分别为m/z380.4→183.0和m/z 364.2→167.0）。按中国药典规定进行相应的方法学考察。结果:血浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.056 3¹1.3μg·m L^-1（r=0.993 6）、0.398²5.5μg·m L^-1（r=0.995 9）,定量下限（LLOQ）分别为0.056 3μg·m L^-1、0.039 8μg·m L^-1;脑匀浆中葛根素和梓醇的线性范围分别为0.028 2².25μg·m L^-1（r=0.996 4）、0.019 9².25μg·m L^-1（r=0.998 5）,LLOQ分别为0.028 2μg·m L^-1、0.019 9μg·m L^-1。葛根素和梓醇日内、日间精密度均小于15%,准确度为81.7%¹10.0%,相对提取回收率为81.3%¹05.0%,基质效应的RSD均小于15%。小鼠灌胃梓葛纳米晶混悬液后,小鼠血浆中葛根素和梓醇的t1/2分别为（2.14±1.13）h和（1.70±0.41）h,脑匀浆中的t1/2分别为（4.30±1.63）h和（3.88±1.09）h;血浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为（7.40±3.05）mg·L^-1·h^-1和（32.13±5.29）mg·L^-1·h^-1,脑匀浆中葛根素和梓醇AUC0-t分别为（1.29±0.42）mg·L^-1·h^-1和（0.54±0.16）mg·L^-1·h^-1。结论:该法专属性强,灵敏、准确、快捷,适用于梓葛配伍制剂的药动学研究。