【摘 要】
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目的 建立从人结直癌组织中提取gp-96肽复合物方法,并检测体外免疫效应.方法 采取三步蛋白纯化法,即硫酸铵沉淀法、ConA亲和层析法、阴离子交换蛋白亲和层析法,从10例结直癌组织提取、纯化gp-96肽复合物;SDS-PAGE和Western blot鉴定gp-96肽复合物;检测GP-96肽复合物的体外免疫效应.结果 该方法提取的蛋白质经SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实是gp-
【机 构】
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武汉市中心医院肿瘤科,430032,430071,武汉大学中南医院肿瘤外科肿瘤生物学行为湖北省重点实验室,430071,武汉大学中南医院肿瘤外科肿瘤生物学行为湖北省重点实验室,430071,武汉大学中
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目的 建立从人结直癌组织中提取gp-96肽复合物方法,并检测体外免疫效应.方法 采取三步蛋白纯化法,即硫酸铵沉淀法、ConA亲和层析法、阴离子交换蛋白亲和层析法,从10例结直癌组织提取、纯化gp-96肽复合物;SDS-PAGE和Western blot鉴定gp-96肽复合物;检测GP-96肽复合物的体外免疫效应.结果 该方法提取的蛋白质经SDS-PAGE和Western blot鉴定,证实是gp-96肽复合物,蛋白质得率为50μg/g;体外免疫效应分析:肿瘤组中gp96肽复合物组肿瘤坏死因子(TNF)-α浓度为(801.54±109.25)ng/L,与阳性对照组(509.17±65.34)ng/L、阴性对照组(156.19±32.08)ng/L比较明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组与肿瘤组比较,gp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).肿瘤组中gp96肽复合物组IL-10浓度为(95.71±17.55)ng/L,与阳性对照组(334.55±69.00)ng/L、阴性对照组(205.75±42.04)ng/L比较,差异有统计学意义(P<0.01);健康人对照组和肿瘤组比较,sp96肽复合物组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 使用该方法提取结直癌组织中gp-96肽复合物具有操作简单、重复性好、获得率高、体外免疫效应强等特点。
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