【摘 要】
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目的：分离克隆人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）编码的病毒复制负调控因子（Negative factor,Nef）基因,并将其导入BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中进行表达。方法：根据GenBank登记的Nef基因核
【机 构】
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南京医科大学第一附属医院泌尿外科,南京医科大学微生物学与免疫学系
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目的：分离克隆人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）编码的病毒复制负调控因子（Negative factor,Nef）基因,并将其导入BCBL-1细胞和NIH/3T3细胞中进行表达。方法：根据GenBank登记的Nef基因核苷酸序列设计PCR引物,在其5′端分别引入EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点;以含有Nef基因的pCINL质粒为模板,扩增Nef基因,经双酶切后克隆进真核表达载体pCI-neo中。为了便于蛋白检测,在下游引物5′端引入Flag序列,构建重组真核表达质粒。重组质粒经酶切鉴定、核酸序列测定和分析后分
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