【摘 要】
：
目的 针对普通人冠状病毒（humancoronavirus，HCoV）基因组较大、难以分离培养的特点，建立无需分离、直接从微量临床呼吸道样本中扩增HCoV-0C43全基因组序列的PCR方法。方法从HCoV-OC43检测阳性的鼻咽洗液样本中提取核酸，用逆转录的方法获得病毒cDNA，根据GenBank中HCoV-OC43序列设计一整套合成扩增引物，根据样本PCR扩增结果进行引物序列和扩增条件的优化，序
【机 构】
：
北京协和医学院中国医学科学院病原生物学研究所,100730,北京协和医学院中国医学科学院病原生物学研究所,100730,北京协和医学院中国医学科学院病原生物学研究所,100730,北京协和医学院中国医
论文部分内容阅读
目的 针对普通人冠状病毒（humancoronavirus，HCoV）基因组较大、难以分离培养的特点，建立无需分离、直接从微量临床呼吸道样本中扩增HCoV-0C43全基因组序列的PCR方法。方法从HCoV-OC43检测阳性的鼻咽洗液样本中提取核酸，用逆转录的方法获得病毒cDNA，根据GenBank中HCoV-OC43序列设计一整套合成扩增引物，根据样本PCR扩增结果进行引物序列和扩增条件的优化，序列测定后进行拼接和序列特点分析。结果建立了基于普通PCR方法的HCoV．0C43全基因组序列扩增体系，利用200tzl呼吸道样本可完成全基因组序列的扩增和验证，并成功从60份临床样本中获得40株全基因组序列。结论所建立方法可利用微量呼吸道样本获取HCoV-0C43病毒全基因组序列，为系统分析HCoV-0C43的基因组变异和进化特征提供了简单易行的技术方法。
其他文献
目的 评价风疹病毒IgG抗体亲和力检测对近期感染诊断的应用价值.方法 对三个人群样本进行了风疹病毒IgG抗体亲和力检测,包括近期感染样本:BIOMEX公司风疹病毒血清转化盘RP-001、RP-014、RP-011共计48份;风疹病毒IgM阳性样本38份;风疹病毒既往感染(IgM阴性IgG阳性)样本978份.结果 三个BIOMEX公司血清转化盘RP-001(至感染后第50天)、RP-014(至感染后
目的 研究艾滋病痴呆综合征(ADC)患者体内HIV-1 nef基因变异规律,为ADC发病机制的研究提供依据.方法 提取1例ADC病例尸检标本的外周(脾)和中枢神经系统(基底核、额叶灰质、脑膜、颞叶)共5个部位组织中的基因组DNA,PCR扩增HIV-1 nef基因,与pMD19-T克隆载体连接后,蓝白斑筛选挑取阳性菌落测序,序列经BLAST分析后,每个部位取5个序列,利用Bioedit、MEGA4等
目的 BALB/c小鼠初次感染流感病毒(A/California/7/2009(H1N1)(pCA07)和A/Guangzhou/333/99(H9N2)(GZ333))后,用流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34(H1N1)(PR8) 10倍致死剂量攻击,观察攻毒后小鼠的反应.方法 BALB/c小鼠150只,分成3组,空白对照组PBS滴鼻,实验组分别感染甲型H1N1流感病毒pCA07和禽源H9N2
目的 建立检测丙型肝炎病毒(HCV)的量子点编码微球蛋白芯片方法.方法 利用量子点编码微球芯片和免疫荧光技术将高度纯化的HCV NS3、NS4、NS5和Core共价偶联到4种不同颜色编码微球表面,用免疫荧光法检测抗HCV抗体；以建立的量子点编码微球蛋白芯片方法对120例重组免疫印迹法(recombinant immunoblot assay,RIBA)确认的HCV阳性患者和50例阴性患者进行检测,
四跨膜蛋白家族(transmenbrane 4 super family,TM4SF)成员也称tetraspanin,是一类存在于真核多细胞生物细胞膜上的蛋白家族,相对分子质量为(21 ～28) ×103.其结构为横跨四次细胞膜的Ⅲ型膜糖蛋白复合体,含有4个高度疏水的跨膜结构域.胞质区为短的N2末端和稍长的C2末端,并在4个跨膜结构域之间形成2个一大一小的细胞外环.其中大环及其跨膜区构成了四跨膜蛋
目的 探讨PrP蛋白和PrP106-126多肽对14-3-3蛋白二聚体形成的影响 方法 将重组表达纯化的0.25 μg、0.5 μg和1μg PrP蛋白、人工合成的PrP06-126肽分别与重组的14-3-3β共孵育,分别通过非变性聚丙烯酰胺凝胶的Western Blott检测PrP蛋白和PrP106-126肽对14-3-3β二聚体和多聚体的形成影响.将不同浓度的PrP与250 μmol/L的Pr
近年来的研究表明内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ER stress)参与多种肝脏疾病的发生、发展及转归.发现乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)等病毒感染可诱导肝细胞ER stress反应,并与病毒复制、肝细胞损伤、肝癌发生等相关.本文将对肝炎病毒感染与ER stress的研究现状进行综述。
目的 探讨不同级别胶质瘤组织中水通道蛋白4(AQP4)表达水平的差异.方法 取我院自2008年至2012年间胶质瘤共57例石蜡包埋的肿瘤组织及10例正常脑组织,采用免疫组化法检验其AQP4水平并行统计学检验.结果 高级别胶质瘤肿瘤组织的AQP4表达水平高于低级别胶质瘤和正常脑组织的AQP4表达水平(P＜0.05),而低级别胶质瘤的肿瘤组织与正常脑组织之间的AQP4表达水平差异无统计学意义(P＞0.
目的 比较DC-LMP2与rAd-LMP2在BALB/c小鼠中的免疫效果.方法 从BALB/c小鼠中分离骨髓细胞,在细胞因子作用下体外诱导培养获得小鼠树突状细胞(mDC),再以100 MOI的含EB病潜伏膜蛋白2的重组腺病毒(rAd-LMP2)感染,获得DC-LMP2,免疫酶法确定LMP2在DC中表达.于0,2,4周,分别以PBS、DC-LMP2和rAd-LMP2肌肉免疫BALB/c小鼠,第5和8
目的 分析2009-2012年引起吉林省手足口病(hand foot and mouth disease,HFMD)流行的肠道病毒71型(EV-A71)的VP1区氨基酸位点的特征性变异位点.方法 对2009-2012年分离于吉林省HFMD病例的70株EV-A71分离株的VP1编码区进行逆转录-聚合酶链反应,然后对扩增产物进行核苷酸序列测定,使用Bioedit软件和MEGA 4.0软件分析VP1区氨