一株新型牛源肺炎克雷伯菌噬菌体的分离鉴定

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[背景]肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)是一种广泛分布于环境中的重要致病菌,该菌较高的耐药性致其在养殖业中治疗较为困难.[目的]分离一株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体,对分离株进行生物学特性鉴定和基因组学分析.[方法]使用双层平板法从四川省某奶牛场中分离、纯化出一株裂解性噬菌体,测定其裂解谱、热稳定性、酸碱耐受度、最佳感染复数及一步生长曲线等生物学特性,并进行全基因组的测序及注释分析.[结果]得到一株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体vB_Kpn_B01,该噬菌体拥有透明且无晕环的噬菌斑,热稳定性较高,在极酸或极碱环境下不进行裂解活动,特异性较强,属长尾噬菌体科(Siphoviridae).vB_Kpn_B01全基因组大小为113227 bp,GC含量为47.97%.注释结果显示噬菌体拥有149个编码序列和25个tRNAs,不含耐药基因及毒力基因.通过噬菌体的进化树分析发现,该噬菌体为Sugarlandvirus.[结论]vB_Kpn_B01拥有高效的生长特性和对不利环境的低耐受性,拥有裂解宿主菌的必备基因,并不含耐药基因及毒力基因,具有应用于畜牧业中防治多重耐药细菌的潜力.
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[背景]解纤维梭菌是发酵木质纤维素生产乙醇的中温模式菌株,构建可控诱导的基因打靶技术是研究解纤维梭菌遗传调控的重要手段.[目的]在解纤维梭菌中构建脱水四环素诱导的ClosTron基因打靶系统.[方法]首先,分析解纤维梭菌对脱水四环素的敏感性,筛选合适的诱导剂浓度,并以β-葡萄糖苷酶为报告基因,检测其在解纤维梭菌中的诱导效果.然后,将脱水四环素诱导型操纵子与Ⅱ型内含子元件组合,构建脱水四环素诱导的ClosTron质粒.最后,以解纤维梭菌mspI、ldh和ack为例,检测其在解纤维梭菌中的打靶效率.[结果]脱
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群体感应(Quorum Sensing,QS)是微生物群体在生长过程中,随着群体密度的增加,其分泌的“信号分子”的浓度达到一定阈值后与微生物体内特定受体结合,从而影响微生物特定基因表达,导致其生理和生化特性的变化,表现出少量菌体或单个菌体所不具备的特征.1994年Fuqua提出群体感应概念后就成为微生物领域的研究热点.然而,群体感应的研究主要集中在细菌中,但近年来群体感应在噬菌体、真菌中也不断被发现,尤其自2017年Erez在多种枯草芽孢杆菌噬菌体中发现群体感应现象,并且揭示噬菌体群体感应主要调控其溶源-
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