【摘 要】
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目的 探讨人胎盘间充质干细胞来源的外泌体(hPMSC-exs)对脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMEC)损伤的影响及可能的机制.方法 体外扩增培养hPMSC,收集细胞培养上清,Exo
【机 构】
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宁夏医科大学临床医学院,宁夏银川750003;宁夏人类干细胞研究所,宁夏银川750004;宁夏医科大学总医院心脑血管病医院ICU,宁夏银川750012;宁夏医科大学临床医学院,宁夏银川750003;宁
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目的 探讨人胎盘间充质干细胞来源的外泌体(hPMSC-exs)对脂多糖(LPS)诱导的人肺微血管内皮细胞(HPMEC)损伤的影响及可能的机制.方法 体外扩增培养hPMSC,收集细胞培养上清,ExoQuick外泌体提取和纯化试剂盒分离、纯化上清液中hPMSC-exs.透射电镜观察外泌体形态特征,Western blot法检测外泌体表面特异性标志物CD9、CD63的表达.构建hPMSC与HPMEC非接触共培养体系,实验分为对照组、LPS损伤组、hPMSC组和hPMSC-exs组.共培养12 h后,检测各组上室渗透到下室中的异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)荧光强度以确定单层肺血管内皮的通透性;1,1'-十八烷基-3,3,3',3'-四甲基吲哚羰花青高氯酸酯(DiI)标记hPMSC-exs并在荧光显微镜下观察对损伤内皮的迁移作用;CCK-8法检测各组上室细胞增殖水平;线粒体膜电位检测试剂盒检测各组上室内皮细胞线粒体膜电位;Western blot法检测下室HPMEC自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、beclin-1的蛋白表达.结果 获得的hPMSC-exs直径在30～120 nm,CD9、CD63表达阳性,符合hPMSC-exs表型特征;与LPS损伤组相比,hPMSC组及hPMSC-exs组FITTC-dextran荧光强度值降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ比值增加、beclin-1蛋白表达上调,细胞增殖率提高.与hPMSC组相比,hPMSC-exs组荧光显微镜下内皮细胞间连接大致完整、FITC-dextran荧光强度值、内皮细胞增殖率、线粒体膜电位、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值及beclin-1表达水平均无明显变化.结论 hPMSC-exs可减轻LPS诱导的HPMEC损伤,改善细胞内线粒体功能,其作用机制可能与增加HPMEC自噬有关.
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