【摘 要】
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目的建立从单个B细胞扩增天然配对的B细胞受体(BCR)重链和轻链基因的方法。方法以用于亚洲人全基因组测序的"炎黄(YH)"细胞的永生化细胞系为材料,运用流式细胞术得到CD19+的
【机 构】
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深圳华大生命科学研究院; 中国科学院大学华大教育中心; Complete,Genomics,Inc.;
【基金项目】
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中央引导地方科技发展专项资金(2016年度)
论文部分内容阅读
目的建立从单个B细胞扩增天然配对的B细胞受体(BCR)重链和轻链基因的方法。方法以用于亚洲人全基因组测序的"炎黄(YH)"细胞的永生化细胞系为材料,运用流式细胞术得到CD19+的单个B细胞,在单管里对单细胞进行裂解,获得总RNA,逆转录生成c DNA,两步巢式PCR扩增来源于同一个B细胞的天然配对的抗体重链和轻链,获得单个B细胞的全人源抗体的可变区序列信息。结果建立了稳定的单细胞BCR扩增方法,抗体基因扩增成功率高达80%以上。运用此方法,流式细胞术分选的单个B细胞在-80℃冻存2周以内仍能成功扩增;同一管里扩增产物经TA克隆和Sanger测序验证,既包含同一个B细胞的抗体重链基因,也包含其轻链基因,即含有天然抗体配对信息。自主设计和整理了一套行之有效的单细胞BCR引物。结论成功建立从单个B细胞扩增全人源抗体重链和轻链基因的方法。
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