【摘 要】
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为建立检测溶藻弧菌(VA)的快速检测方法,试验以VA Collagenase基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了DPO-PCR快速检测VA的方法。结果显示,退火温度范围在48℃68℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VA的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.14×102 CFU/m
【机 构】
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海南出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【基金项目】
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海南省社会发展科技专项(2015SF29); 国家质检总局科技项目(2013IK031,2013IK051,2015IK089); 重庆市科技计划项目(cstc2014yykf A80017); 海南省应用技术研究与开发专项项目(ZDXM20130025);
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为建立检测溶藻弧菌(VA)的快速检测方法,试验以VA Collagenase基因为靶基因设计了一对双启动寡核苷酸引物(DPO),建立了DPO-PCR快速检测VA的方法。结果显示,退火温度范围在48℃68℃内都能有效地扩增出目的基因,表明该检测方法对退火温度不敏感;该DPO引物仅与VA的扩增反应呈阳性,而与其他菌株无非特异性扩增反应,表明该方法特异性强;该方法的灵敏度为1.14×102 CFU/m L。利用该检测方法对采集的550份样品进行检测,共计检出4份VA阳性样品,与商检行业标准(SN/T 1870—2007)检测结果一致,显示了良好的实用性。该DPOPCR方法设计简单、特异性强,具有良好的实用性。
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