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【摘 要】目的：通过强抗氧化物维生素E干预绿脓菌素抑制金黄色葡萄球菌过程，研究维生素E能否起到拮抗和减弱绿脓菌素抑菌活性的作用。方法：在金黄色葡萄球菌的绿脓菌素药敏试验中，比较维生素E干预其过程前后抑菌环的变化。结果：维生素E干预后比干预前抑菌环直径明显减小。结论：维生素E作为抗氧化物通过清除过氧化物等自由基起到拮抗绿脓菌素抑菌活性的作用。
【关键词】抗氧化物；维生素E；干预；绿脓菌素；拮抗
铜绿假单胞菌是医院感染中极其重要的条件致病菌之一，可引起各种感染。尤其是多重耐药菌株和泛耐药菌株的出现，不合理地应用抗生素，临床上治疗越来越困难。由于铜绿假单胞菌的耐药机制极其复杂，所以需用多种综合手段来治疗其感染。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 收集从临床标本中分离的铜绿假单胞菌10株和金黄色葡萄球菌3株。
1.2 试剂 普通营养琼脂和M-H培养基购自杭州天和微生物试剂公司，维生素E购自湖南公司。
1.3 方法
1.3.1 制备绿脓菌素纸片 分别挑取各株铜绿假单胞菌纯菌落接种于普通营养琼脂斜面培养基上，35℃孵育48小时后，用氯仿5ml冲洗斜面上的细菌，萃取绿脓菌素，各取20ul滴于滤纸上，制成绿脓菌素纸片，放置培养箱中干燥备用。
1.3.2 药敏试验 将金黄色葡萄球菌用生理盐水制成0.5麦氏单位菌悬液，涂布划线于M-H平板，贴绿脓菌素纸片作为对照组，试验组为同样方法做药敏试验，不同之处在于取50ul维生素E用棉签涂在绿脓菌素周围的金黄色葡萄球菌菌悬液上，为了不影响绿脓菌素的自由扩散，贴绿脓菌素药敏纸片后放置8～10分钟，再涂维生素E。孵育18～24小时，测量抑菌环直径。
1.4 统计 试验组和对照组数据采用SPSS 19.0软件成对样本t检验处理分析。
2 结果
试验组抑菌环直径为19.23±4.33，对照组抑菌环直径23.61±3.98。经成对样本t检验统计有统计学意义。
3 讨论
据全国2011年度各医院痰标本分离菌株统计，前5位菌种分别为非发酵菌的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌、肠杆菌科的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌以及金黄色葡萄球菌[1]。特别是多重耐药和泛耐药菌株的出现，临床上对其引起感染的治疗越来越棘手。研究发现，铜绿假单胞菌对细菌的抑制作用，主要是其产生绿脓菌素（PA）[2]。PA是一种具有生物活性的代谢产物，也是铜绿假单胞菌的重要致病因子。在有氧条件下，参与氧化还原循环周期，产生过氧化物诱导细胞损伤；另一方面，它对人体细胞的损伤的研究显示，它能钝化过氧化物酶，而不是锰超氧化物歧化酶（MnSOD）或铜-锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）。PA能减少基因编码的过氧化酶的转录，在无细胞系统中直接抑制过氧化酶的活性，通过添加MnSOD，过氧化物酶的钝化可部分恢复，提示氧自由基在铜绿假单胞菌介导的损伤中具有重要意义[3]。PA通过自身的氧化产生氧自由基损伤细胞，引起细胞死亡，可见氧自由基在过程中起着关键性的作用。由于铜绿假单胞菌的耐药机制非常复杂，单一手段治疗往往很难奏效，针对它的耐药机制选择药物，如产生物被膜的菌株，在治疗中可加入大环内酯类药物，对PA造成的细胞损伤，可用抗氧化物维生素E清除铜绿假单胞菌杀菌过程中产生的氧自由基来拮抗其作用[4-5]。这样可减少和滥用抗生素，达到合理使用抗生素的目的。
参考文献
[1]李湘燕，吕媛.卫生部全国细菌耐药监测网2011年痰标本来源细菌耐药监测[J].中国临床药理学杂志，2012，28（12）：921-926.
[2]秦金喜，李仲兴，杨永昌等.铜绿假单胞菌抗菌物质对屎肠球菌的体外抑菌作用研究[J].中国卫生检验杂志，2012，22（7）：1591-1594.
[3]柴文戍，陈佰义.绿脓菌素在铜绿假单胞菌感染中的作用[J].国际呼吸杂志，2007，27（23）：1811-1814.
[4] Bardowell S A， Duan F， Manor D， et al. Disruption of mouse cytochrome p450 4f14 （Cyp4f14 gene） causes severe perturbations in vitamin E metabolism[J]. Journal of Biological Chemistry， 2012， 287（31）： 26077-26086.
[5] Farley S M， Leonard S W， Labut E M， et al. Vitamin E decreases extra‐hepatic menaquinone‐4 concentrations in rats fed menadione or phylloquinone[J]. Molecular nutrition & food research， 2012， 56（6）： 912-922.
【关键词】抗氧化物；维生素E；干预；绿脓菌素；拮抗
铜绿假单胞菌是医院感染中极其重要的条件致病菌之一，可引起各种感染。尤其是多重耐药菌株和泛耐药菌株的出现，不合理地应用抗生素，临床上治疗越来越困难。由于铜绿假单胞菌的耐药机制极其复杂，所以需用多种综合手段来治疗其感染。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 收集从临床标本中分离的铜绿假单胞菌10株和金黄色葡萄球菌3株。
1.2 试剂 普通营养琼脂和M-H培养基购自杭州天和微生物试剂公司，维生素E购自湖南公司。
1.3 方法
1.3.1 制备绿脓菌素纸片 分别挑取各株铜绿假单胞菌纯菌落接种于普通营养琼脂斜面培养基上，35℃孵育48小时后，用氯仿5ml冲洗斜面上的细菌，萃取绿脓菌素，各取20ul滴于滤纸上，制成绿脓菌素纸片，放置培养箱中干燥备用。
1.3.2 药敏试验 将金黄色葡萄球菌用生理盐水制成0.5麦氏单位菌悬液，涂布划线于M-H平板，贴绿脓菌素纸片作为对照组，试验组为同样方法做药敏试验，不同之处在于取50ul维生素E用棉签涂在绿脓菌素周围的金黄色葡萄球菌菌悬液上，为了不影响绿脓菌素的自由扩散，贴绿脓菌素药敏纸片后放置8～10分钟，再涂维生素E。孵育18～24小时，测量抑菌环直径。
1.4 统计 试验组和对照组数据采用SPSS 19.0软件成对样本t检验处理分析。
2 结果
试验组抑菌环直径为19.23±4.33，对照组抑菌环直径23.61±3.98。经成对样本t检验统计有统计学意义。
3 讨论
据全国2011年度各医院痰标本分离菌株统计，前5位菌种分别为非发酵菌的铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌、肠杆菌科的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌以及金黄色葡萄球菌[1]。特别是多重耐药和泛耐药菌株的出现，临床上对其引起感染的治疗越来越棘手。研究发现，铜绿假单胞菌对细菌的抑制作用，主要是其产生绿脓菌素（PA）[2]。PA是一种具有生物活性的代谢产物，也是铜绿假单胞菌的重要致病因子。在有氧条件下，参与氧化还原循环周期，产生过氧化物诱导细胞损伤；另一方面，它对人体细胞的损伤的研究显示，它能钝化过氧化物酶，而不是锰超氧化物歧化酶（MnSOD）或铜-锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）。PA能减少基因编码的过氧化酶的转录，在无细胞系统中直接抑制过氧化酶的活性，通过添加MnSOD，过氧化物酶的钝化可部分恢复，提示氧自由基在铜绿假单胞菌介导的损伤中具有重要意义[3]。PA通过自身的氧化产生氧自由基损伤细胞，引起细胞死亡，可见氧自由基在过程中起着关键性的作用。由于铜绿假单胞菌的耐药机制非常复杂，单一手段治疗往往很难奏效，针对它的耐药机制选择药物，如产生物被膜的菌株，在治疗中可加入大环内酯类药物，对PA造成的细胞损伤，可用抗氧化物维生素E清除铜绿假单胞菌杀菌过程中产生的氧自由基来拮抗其作用[4-5]。这样可减少和滥用抗生素，达到合理使用抗生素的目的。
参考文献
[1]李湘燕，吕媛.卫生部全国细菌耐药监测网2011年痰标本来源细菌耐药监测[J].中国临床药理学杂志，2012，28（12）：921-926.
[2]秦金喜，李仲兴，杨永昌等.铜绿假单胞菌抗菌物质对屎肠球菌的体外抑菌作用研究[J].中国卫生检验杂志，2012，22（7）：1591-1594.
[3]柴文戍，陈佰义.绿脓菌素在铜绿假单胞菌感染中的作用[J].国际呼吸杂志，2007，27（23）：1811-1814.
[4] Bardowell S A， Duan F， Manor D， et al. Disruption of mouse cytochrome p450 4f14 （Cyp4f14 gene） causes severe perturbations in vitamin E metabolism[J]. Journal of Biological Chemistry， 2012， 287（31）： 26077-26086.
[5] Farley S M， Leonard S W， Labut E M， et al. Vitamin E decreases extra‐hepatic menaquinone‐4 concentrations in rats fed menadione or phylloquinone[J]. Molecular nutrition & food research， 2012， 56（6）： 912-922.