【摘 要】
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结合等温链替代扩增(ISDA)和指数扩增(EXPAR)设计一种非标记、高灵敏的Pb2+荧光生物传感体系.在Pb2+存在情况下,底物链被活化的GR-5 DNAzyme快速切割释放引物1.引物1与模板1
【机 构】
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上海海洋大学食品学院,上海201306;上海水产品加工及贮藏工程技术中心,上海201306;农业农村部水产品贮藏保鲜质量安全风险评估实验室,上海201306
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结合等温链替代扩增(ISDA)和指数扩增(EXPAR)设计一种非标记、高灵敏的Pb2+荧光生物传感体系.在Pb2+存在情况下,底物链被活化的GR-5 DNAzyme快速切割释放引物1.引物1与模板1杂交,并被DNA聚合酶(BSM)延伸形成带限制性内切酶(Nt.BbvCI)识别序列的双链核苷酸.BSM从Nt.BbvCI切割产生的切口再次延伸形成双链核苷酸,并释放信号G4-DNA片段.G4-DNA片段同时又可以作为模板2的引物,启动指数放大过程,从而释放更多的信号G4-DNA片段.扩增产物G4-DNA与原卟啉锌(ZnPPIX)相互结合从而产生强烈的荧光信号.详细优化了多种因素对检测体系的影响,在最优实验条件下,此方法对Pb2+的线性检测范围为0.1～50.0 nmol/L,检出限为0.03 nmol/L(S/N =3),回归方程为y =288.7x+744.7(y为荧光强度,x为Pb2+浓度).干扰实验表明,该传感器对Pb2+具有良好的特异性和选择性.该传感体系成功应用于环境水体中Pb2+含量检测,加标回收率为94.0％～103.0％.本方法操作简单、选择性好、灵敏度高、有较强的抗干扰性能,可用于环境水样中Pb2+的高灵敏检测.
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