【摘 要】
：
CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除，通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株Saccharomyces cerevisiae 1211半乳糖代谢负调控基因GAL80，获得菌株S. cerevisiae 1211-2，在不添加半乳糖诱导的情况下，青蒿酸摇瓶发酵产量达到了740 mg/
【机 构】
：
中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所卫健委抗生素生物工程重点实验室/中国医学科学院药物合成生物学重点实验室
【基金项目】
：
国家科技重大专项（No.2017ZX09101002-003-003）； 国家自然科学基金（No.31870059）资助；
论文部分内容阅读
CRISPR/Cas9基因编辑技术已经被广泛应用于工程酿酒酵母的基因插入、基因替换和基因敲除，通过使用选择标记进行基因编辑具有简单高效的特点。前期利用CRISPR/Cas9系统敲除青蒿酸生产菌株Saccharomyces cerevisiae 1211半乳糖代谢负调控基因GAL80，获得菌株S. cerevisiae 1211-2，在不添加半乳糖诱导的情况下，青蒿酸摇瓶发酵产量达到了740 mg/L。但在50 L中试发酵实验中，S. cerevisiae 1211-2很难利用对青蒿酸积累起到决定性作用的碳源-乙醇，青蒿酸的产量仅为亲本菌株S.cerevisiae1211的20%–25%。我们推测因遗传操作所需的筛选标记URA3突变，影响了其生长及青蒿酸产量。随后我们使用重组质粒pML104-KanMx4-u连同90 bp供体DNA成功恢复URA3基因，获得工程菌株S. cerevisiae 1211-3。S.cerevisiae1211-3能够在葡萄糖和乙醇分批补料的发酵罐中正常生长，其青蒿酸产量可达20g/L以上，与亲本菌株产量相当。研究不但获得了不加半乳糖诱导的青蒿酸生产菌株，同时首次发现营养缺陷型标记URA3基因显著影响工业发酵（乙醇作为补料）中青蒿酸的产生，也为酵母作为底盘进行其他天然产物生产提供借鉴。
其他文献
本文概述了会泽县退耕还林工程的实施现状,总结了会泽县实施退耕还林工程的先进经验及存在的主要问题,提出了以群众意愿为主落实地块,年度计划任务下达尽量提前,加大政策扶持力度,适当提高补助标准、延长补助期限等保护生态环境、促进农民增产增收的退耕还林工程实施对策。
云南省宾川县地处金沙江南岸干热河谷地带,资源丰富,但干旱少雨。宾川县林业部门利用高效节水灌溉项目结合水果上山的规划,实施退耕还林工程,在25度以上的陡坡、耕地,发展柑橘、石榴、冬桃、核桃、咖啡、橄榄、青花椒等具有区域特色的经济林,提升退耕还林和荒山造林的经济价值,实现生态建设和经济发展双赢。自2002年以来,宾川县共实施退耕还林还草15.64万亩,其中退耕地还林还草8.84万亩,荒山荒地造林
现阶段,随着我国综合实力不断增强,在可持续发展理念下不断强调加强生态系统建设。其中,荒地治理是重要内容之一,为了使荒地质量达标,需要加强森林建设,加大治理力度,有效保护和改善环境,以提高经济和生态效益。从我国荒地开发的角度来看,森林开发仍然存在一定的不足,因此,必须采取相应的措施,最大限度地保持和发展其多种功能与效益,提高我国荒地建设水平。深入探讨了退耕还林后森林经营应采取的对策,希望有一定的参考
在新一轮退耕还林补助项目到期之际,分析农户现有新一轮退耕规模的收入效应对下一步中国退耕还林政策调整与完善具有重要意义。本文基于赣南、鄂北地区农户调查数据,运用均值回归和分位数回归方法分析了新一轮退耕还林规模对农户收入的影响。研究发现,新一轮退耕还经济林、生态林规模对农户收入效应表现出差异:还经济林规模与农户收入增速之间存在线性正向关系,并更有利于高收入农户;还生态林规模与农户收入增速之间呈现倒U型
为提升线路运能，推动城市轨道交通列车控制系统的升级，提出一种多通信结构列车控制系统下的地铁列车编队运行优化控制策略。分析以T2T、T2G通信体系为核心的列车控制系统框架，并基于各系统不同安全防护模式，结合列车运行属性及线路条件，考虑列车追踪运行及节能目标，构建地铁列车编队运行的非线性优化控制模型。为减小优化控制问题的计算复杂度，以满足列车编队运行的实时控制要求，设计融合预测控制和序列二次规划（SQ
在全国人民高举伟大领袖和导师毛主席的旗帜,认真贯彻英明领袖华主席“抓纲治国”伟大战略决策的一片大好形势下,我院地质系参加海南富铁会战的部分师生,两年多来结合教学和生产开展了对石碌铁矿的成因及富铁矿与构造关系的专题研究。现作一个初步的阶段小结,该小结是在海南富铁会战指挥部和院、系的直接领导下,参加会战的广东934队、桂林地研所、海南铁矿等兄弟单位的大力支持下,我系参加会战的师生共同劳动的集体
本文基于精确子域法建立了电枢磁场、永磁磁场、定子开槽共同作用下的带护套高速永磁同步电机转子涡流损耗解析模型，该模型同时计及了高频谐波磁场所引起的转子涡流反作用的影响。该模型在槽子域和永磁体子域中同时考虑了定子绕组电流和永磁体剩磁，故利用该解析模型可以同时计算电枢磁场、理想空载磁场和负载合成磁场作用下的转子涡流损耗；为提高解析模型计算精度，也在转子导体区域内求解扩散方程以考虑涡流反作用的影响。本文通
在石碌群主要含矿层及主矿层底部发现火山凝灰岩,经过野外工作和深入研究,提出石碌铁矿床的主要矿质来源可能是海底近源火山喷发作用的看法。
大数据不仅能为我国的国土空间规划与智慧城市建设提供具有真实性的数据，还能为我国国土空间规划与智慧城市建设带来全新机遇。文章重点阐述基于大数据进行国土空间规划的城市建设的有效实践方法，并对国土空间规划与智慧城市建设的概念、大数据背景下国土资源空间规划智慧城市建设与原来建设规划的区别进行深入分析，介绍了长沙市望城滨水新城有效利用大数据对新区的智慧型服务、智能化管理、智能化交通和智能化社区的空间智能化规
本文根据最新测定的海南岛石碌铁矿 Sm-Nd 同位素年龄（841±20Ma）与石碌群第六层所含宏观藻类化石群代表的地质时代完全吻合,进一步肯定含铁矿的石碌群应归属青白口系。同位素测定结果还表明该铁矿的原始物质形成时间与成矿作用为同一时期,结合含矿层底部存在流纹质熔结凝灰岩、稀土模式及矿体产状等特征,推测该铁矿的铁质来源于近源海底火山喷发。