比较Ni²⁺-NTA磁珠和羧基磁珠固定结核分枝杆菌二氢叶酸还原酶（Mycobacteriumtuberculosis dihydrofolate reductase,Mt DHFR）,探索适合小分子配体混合物库筛选的Mt DHFR固定化方法。重组表达带6×His标签Mt DHFR,纯化后表征酶学性质,比较用Ni²⁺-NTA磁珠和羧基磁珠固定化时相应固定化容量、保留活性、稳定性及对抑制剂响应。结果表明,Ni²⁺-NTA磁珠对Mt DHFR固定化容量为（93±12）mg/g磁珠（n=3）,但酶比活保留不超过32%,Ni²⁺明显抑制酶活性,EDTA与Ni²⁺呈协同抑制效应,Fe³⁺无显著干扰。羧基磁珠活化固定Mt DHFR的容量（8.6±0.6） mg/g磁珠（n=3）,固定化酶比活保留（87±4）%（n=3）。在含50 mmol/L KCl的100 mmol/L HEPES （pH 7.0）中,游离和固定化Mt DHFR在0℃保存16 h活性都无显著改变,但在25℃保存16 h,游离酶活性下降近60%而羧基磁珠固定化Mt DHFR活性下降仅35%。甲氨喋呤对游离Mt DHFR和固定化Mt DHFR的IC50无显著差异（P>0.05）。综上,Ni²⁺-NTA磁珠不适合固定化Mt DHFR;羧基磁珠固定化Mt DHFR能保留活性、热稳定性及对抑制剂的响应,该固定化方法有望用于快速筛选其配体混合物库。