论文部分内容阅读
目的探讨miR-433对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖和致肿瘤性的影响及相关的分子机制。方法q PCR检测人PTC组织和对应的正常组织、正常甲状腺上皮细胞Nthyori3-1和人PTC细胞系TPC-1、BCPAP及K1中miR-433表达水平。miR-433模拟物及NC-miRNA转染TPC-1细胞,CCK-8测定细胞增殖情况,q PCR和Western blot分别检测miR-433、PIK3CA mRNA和蛋白表达水平。生物信息学软件Target Scan预测miR-433的靶作用位点,并通过q PCR、Western blot和荧光素酶活性实验证实miR-433的靶作用位点。TPC-1细胞共转染miR-433模拟物及PIK3CA过表达质粒,q PCR、western blot、CCK-8和流式细胞术分别检测PI3KCA mRNA、蛋白表达及TPC-1细胞增殖和细胞周期分布;慢病毒介导的miR-433过表达TPC-1细胞分别通过皮下注射的方式注射入裸鼠左右侧,皮下注射后7、14、21、28、35 d分别测量肿瘤体积,以探讨miR-433对体内肿瘤生长的影响。结果与人正常组织及甲状腺上皮细胞Nthyori3-1相比,PTC组织和PTC细胞中miR-433表达显著下调(P<0.05);CCK-8检测细胞增殖结果表明,与NC-miRNA转染组相比,miR-433转染组PTC细胞增殖速率显著下降(P<0.05),且转染miR-433后,G0/G1期TPC-1细胞比率显著升高,而S期细胞比率显著下降(P<0.05);Target Scan生物学软件预测表明PIK3CA为miR-433潜在的靶基因,荧光素酶实验、q PCR和Western blot结果进一步证实PIK3CA的3’非翻译序列(3’UTR)是miR-433的直接靶点;CCK-8和细胞流式分析结果表明过表达PIK3CA部分逆转了miR-433对TPC-1细胞增殖的抑制作用。结论 miR-433通过靶向作用于PIK3CA基因抑制PTC细胞增殖,其可能为PTC的临床治疗提供新的靶标。