【摘 要】
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目的建立副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)的PCR-焦磷酸测序方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因设计扩增引物和测序引物,先用PCR特异性地扩增目的片段,再制备单链模
【机 构】
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广东出入境检验检疫局; 南方医科大学;
【基金项目】
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广东省科技项目(2010B020316007);广东出入境检验检疫局科研项目(2011GDK15)~~
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目的建立副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,VP)的PCR-焦磷酸测序方法。方法根据副溶血性弧菌toxR基因设计扩增引物和测序引物,先用PCR特异性地扩增目的片段,再制备单链模版,最后用焦磷酸测序法检测DNA碱基序列,检测的序列为CCAAGGATTCACAGCAGAAGCCACAGGTGCTTTT,则判断为副溶血性弧菌。结果扩增引物和测序引物表现出良好的特异性。PCR扩增结果:20株VP均扩增出大小为137bp的DNA片段,而创伤弧菌等对照菌株未扩增出DNA条带。焦磷酸测序结果:20株副溶血性弧菌均测出与预期相符的DNA碱基序列,而其他对照菌株未测出DNA碱基序列或检测结果与测序引物后的序列不匹配。VP标准菌株ATCC17802发生A-T突变,密码子CCU变成CCA,而两个密码子都是脯氨酸的密码子。结论该方法特异性高,是快速检测VP有效手段。
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