目的构建膀胱平滑肌细胞（bladder smooth muscle cells,BSMCs）M₃型受体干扰RNA慢病毒载体。方法合成4条M₃受体干扰序列,构建GV118-sh-M₃慢病毒载体,测序验证序列。将GV118-sh-M₃慢病毒载体与质粒p Helper1.0、p Helper 2.0三个载体共转染293T细胞,收集病毒颗粒并用荧光法检测4组病毒滴度。体外原代培养BSMCs,4组GV118-sh-M₃慢病毒（KD1、KD2、KD3和KD4）转染BSMCs,观察绿色荧光蛋白表达并通过RT-PCR、Western blotting法检测各组干扰效率。结果成功构建4个GV118-sh-M₃慢病毒载体,测序结果符合设计序列。4组GV118-sh-M₃慢病毒滴度分别为2×10⁸、6×10⁸、5×10⁸和5×10⁸TU/m L。分别转染BSMCs后,KD1组绿色荧光蛋白表达量最高且干扰效率最高。结论成功包装并筛选了GV118-sh-M₃慢病毒载体,为后续进一步研究干扰M₃受体在神经源性膀胱中的作用奠定了基础。