【摘 要】
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目的 构建靶向结缔组织生长因子(CTGF)的shRNA慢病毒载体并检测其介导的RNA干扰(RNAi)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)CTGF表达的影响,为进一步研究CTGF在增殖性玻璃体视网
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院眼科
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目的 构建靶向结缔组织生长因子(CTGF)的shRNA慢病毒载体并检测其介导的RNA干扰(RNAi)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)CTGF表达的影响,为进一步研究CTGF在增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)中的功能奠定基础.方法 设计并合成三对针对CTGF的siRNA,通过Western Blot筛选有效靶点,合成有效靶点的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与线性化的pGC-LV-GFP载体连接,通过PCR筛选阳性克隆并进行DNA测序鉴定;将重组CTGF shRNA的质粒与病毒包装的辅助质粒共转染293T细胞,将包装产生的慢病毒感染ARPE-19细胞,Western Blot检测CTGF的表达.结果 通过双酶切和基因测序证实靶向CTGF的shRNA慢病毒载体构建成功,Western Blot证实经慢病毒感染后的ARPE-19细胞中的CTGF的蛋白水平明显减低.结论 成功构建了靶向CTGF的shRNA慢病毒表达载体,体外感染ARPE-19细胞可有效降低CTGF蛋白的表达,为深入研究CTGF在PVR中的功能提供了有力的工具.
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